[发明专利]一种‘凤丹’牡丹幼胚离体再生及遗传转化体系的建立方法

权利要求书

1.一种‘凤丹’牡丹幼胚离体再生的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)‘凤丹’牡丹幼胚接种于幼胚萌发培养基上萌发培养，得萌发幼胚；

所述幼胚萌发培养基以1/2MS为基础培养基，还包括以下含量的组分：27～33g/L葡萄糖、14～18g/L琼脂浓度、2.8～3.2mg/L GA3和0.23～0.27mg/LNAA，pH值为5.8～6.0；

2)将所述萌发幼胚接种至幼胚生根培养基上进行光照培养，得到‘凤丹’牡丹植株；

所述幼胚生根培养基以1/2MS为基础培养基，还包括以下含量的组分：0.45～0.55mg/LGA3、0.45～0.55mg/L IBA和0.09～0.11mg/L活性炭。

2.根据权利要求1所述建立方法，其特征在于，所述幼胚萌发培养基还包括以下含量的组分：30g/L葡萄糖、16g/L琼脂浓度、3.0mg/L GA3和0.25mg/LNAA，pH值为5.8。

3.根据权利要求1所述建立方法，其特征在于，所述萌发培养的温度为20～25℃，所述萌发培养的时间为25～32d。

4.根据权利要求1所述建立方法，其特征在于，所述幼胚生根培养基还包括以下含量的组分：0.5mg/L GA3、0.5mg/L IBA和0.1mg/L活性炭。

5.根据权利要求1所述建立方法，其特征在于，所述光照培养的温度20～25℃，所述光照培养的时间为28～32d，所述光照培养的光强为6000～8000Lx。

6.根据权利要求1～5所述建立方法，其特征在于，所述‘凤丹’牡丹幼胚来自当年开花后90d种子。

7.一种‘凤丹’牡丹幼胚遗传转化体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.将含目标基因的植物表达载体转化农杆菌中，依次经筛选培养和扩大培养后，收集菌体，用含有乙酰丁香酮的MS液体培养基悬浮所述菌体，得到农杆菌侵染液；

所述含有乙酰丁香酮的MS液体培养基中乙酰丁香酮的终浓度为250～350μmol/L；

B.以幼胚萌发培养基上培养7～8d的幼胚为材料，用所述农杆菌侵染液侵染所述幼胚8～12min，将侵染后的幼胚在共培养培养基上共培养3～5d，得到共培养幼胚；

所述幼胚萌发培养基以1/2MS为基础培养基，还包括以下含量的组分：27～33g/L葡萄糖、14～18g/L琼脂浓度、2.8～3.2mg/L GA3和0.23～0.27mg/LNAA，pH值为5.8～6.0；

C.将所述共培养幼胚在筛选培养基经筛选培养，得到‘凤丹’牡丹幼胚遗传转化体系。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，步骤A中所述含有乙酰丁香酮的MS液体培养基中乙酰丁香酮的终浓度为300μmol/L；

步骤B中所述侵染的时间为10min；所述共培养的时间为4d。

9.根据权利要求7所述方法，其特征在于，步骤C中所述筛选培养基是以所述幼胚萌发培养基为基础培养基，还包含终浓度为40～60mg/L的潮霉素。

10.根据权利要求7～9任意一项所述方法，其特征在于，步骤B中共培养培养基为所述幼胚萌发培养基。