[发明专利]一种杨树落叶松杨珊锈菌单孢扩繁方法

权利要求书

1.一种杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，包括：挑取染病杨树叶上的落叶松杨珊锈菌单孢子堆接种到健康的杨树叶上，繁殖后利用新的健康的杨树叶扩繁，最终获得大量的单孢系孢子粉。

2.根据权利要求1所述的杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，具体步骤包括：

1)种苗：取易感染杨树落叶松杨珊锈菌的杨树组培苗进行炼苗；

2)菌种初繁：摘取步骤1)得到的杨树苗的健康叶片，制成叶盘后用无菌水洗净，挑取染病杨树叶上的落叶松杨珊锈菌的单孢子堆接种到叶盘上培养，每个叶盘上只接种一个单孢子堆；

3)单孢系转接：待叶盘发病后，分别将每个叶盘上生长的孢子挑接到若干个新的叶盘上进行培养；

4)按单孢系收集孢子粉；

5)单孢系喷接扩繁：将收集的孢子粉配制成孢子悬液，以喷雾的形式接种到多个新的叶盘上继续培养，得到足够的孢子粉。

3.根据权利要求2所述的杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，所述的叶盘的制备和接种后的培养方法为：摘取炼苗后的杨树苗的叶片，去除主脉切成2×2cm的小方块作为叶盘，无菌水洗净，使叶背面朝上置于培养皿中，培养皿底部预先加入滤纸和无菌水保湿，接种后用封口膜封好培养皿进行培养。

4.根据权利要求2所述的杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，所述步骤2)中接种的具体操作为：在洗净的叶盘上均匀喷洒0.05％吐温20，然后将病叶上边缘清晰的单孢子堆用移液枪离散至4μL的0.1g/L琼脂水溶液中，再用移液枪将混有夏孢子堆的琼脂水溶液打在制备好的叶盘上。

5.根据权利要求2所述的杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，所述步骤3)具体为：用10mL一次性注射器的针管对准叶盘上的孢子粉，轻轻刮取孢子粉收集到高温灭菌处理过的离心管内后加入1mL 0.1g/L的琼脂溶液混匀，再分别转接到若干个新的叶盘上，接种前，新叶盘喷洒0.005％吐温20。

6.根据权利要求2所述的杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，所述步骤5)中，孢子悬浮液的配制方法为：将步骤4)收集的孢子粉悬浮在含0.005％吐温20的0.1g/L琼脂溶液中，混合至浓度为2mg/mL的夏孢子悬浮液，使用喷壶使孢子悬浮液以喷雾的形式接种到健康的杨树叶盘上，进一步扩大单孢系的繁殖，得到足够的孢子粉。

7.根据权利要求2所述的杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，步骤2)、3)和5)中，叶盘接种，后置于温度为19℃，光周期为16h/24h的温室中进行培养。

8.根据权利要求2所述的杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，所述步骤3)和步骤5)，在获得的孢子量不够时，分别可重复1～5代。

9.根据权利要求2所述的杨树落叶松杨珊锈菌的单孢扩繁方法，其特征在于，步骤1)中所述易感染杨树落叶松杨珊锈菌的杨树组培苗的品种为NL895。