[发明专利]β-葡聚糖的制备工艺

权利要求书

1.一种β-葡聚糖的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：

1)菌种筛选：准备菌种，分别进行刚果红琼脂染色法定性测试，检测菌种的β-1,3-葡聚糖酶活，进行筛选，得到待培养的裂褶菌菌种，备用；

2)菌种培养；取待培养菌种，斜面种子培养7-8d，培养温度为26-28℃，再接种于平板培养基中，25-30℃下培养7-8d，得到种子液；

3)发酵：取种子液，置于发酵罐中发酵7-8d，得到发酵液；

4)粗提脱色：发酵液进行γ射线辐照，辐照后静置，接着进行高压均质，离心分离，上清液为β-葡聚糖高压均质粗提液，沉淀部分加水后置于-15℃下冻结，25-28℃水浴下解冻，重复冻融操作2-3次，进行微波提取，离心分离，收集上清液，与β-葡聚糖高压均质粗提液合并，脱盐浓缩，再加入大孔树脂，摇床中处理9-10h，处理温度为20-28℃，得到脱色液；

5)脱蛋白：取脱色液，加入聚酰胺粉末，25-28℃下振荡2-2.5h，抽滤，离心，取上清，加入乙醇醇析，析出物干燥，得到β-葡聚糖成品。

2.根据权利要求1所述的β-葡聚糖的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：

1)菌种筛选：准备菌种，分别进行刚果红琼脂染色法定性测试，检测菌种的β-1,3-葡聚糖酶活，进行筛选，得到待培养的裂褶菌菌种，备用；

2)菌种培养；取待培养菌种，斜面种子培养7-8d，培养温度为26-28℃，再接种于平板培养基中，25-30℃、170-180r/min条件下培养7-8d，得到种子液；

3)发酵：取种子液，置于发酵罐中发酵7-8d，搅拌转速100-300r/min，得到发酵液；

4)粗提脱色：发酵液进行γ射线辐照，辐照后静置10-15min，接着进行高压均质，高压均质压力为65-70MPa，均质时间为25-30min，离心分离，上清液为β-葡聚糖高压均质粗提液，沉淀部分加1-2倍量的水，置于-15℃下冻结3-4h，25-28℃水浴下解冻0.5-1h，重复冻融操作2-3次，进行微波提取，离心分离，收集上清液，与β-葡聚糖高压均质粗提液合并，脱盐浓缩，再加入大孔树脂，摇床中处理9-10h，转速为120-150r/min，处理温度为20-28℃，得到脱色液；

5)脱蛋白：取脱色液，加入聚酰胺粉末，25-28℃下振荡2-2.5h，振荡频率为100-150r/min，抽滤，离心，取上清，加入乙醇醇析，析出物干燥，得到β-葡聚糖成品。

3.根据权利要求2所述的β-葡聚糖的制备工艺，其特征在于：步骤4）中，单位体积的微波提取功率为3-4W/ml，提取时间为8-10min，料水比为1：20。

4.根据权利要求2所述的β-葡聚糖的制备工艺，其特征在于：步骤4）中，辐照源为60Co，源强度为200-210kCi，辐照剂量为700-800KGy。

5.根据权利要求2所述的β-葡聚糖的制备工艺，其特征在于：步骤3）中，发酵3-4d后发酵罐中依次加入淀粉脱支酶和糖化酶，温度为28-32℃的条件下进行酶解。

6.根据权利要求2所述的β-葡聚糖的制备工艺，其特征在于：步骤3）中，发酵罐各组分原料包括：普通玉米粉15-25g/L、改性玉米粉3-6g/L、葡萄糖15-20g/L、柠檬酸2-3g/L、维生素0.1-0.3g/L、滑石粉1-1.5g/L、透明质酸0.1-0.3g/L、琼脂15-20g/L、硫酸镁1-2g/L、牛肉膏4-5g/L。

7.根据权利要求6所述的β-葡聚糖的制备工艺，其特征在于：所述改性玉米粉的制备步骤为：取非晶化玉米淀粉、水混合搅拌，制得淀粉乳，再将淀粉乳缓慢滴加至环己烷、三氯甲烷混合液中，接着加入乳化剂、交联剂和引发剂，在50-55℃下反应1-3h，得到改性玉米粉；

所述乳化剂为司盘-60，所述引发剂为过硫酸铵和亚硫酸氢钠混合物，所述交联剂为N，N-亚甲基双丙烯酰胺。