[发明专利]耐热表型稳定遗传、携带负标记的重组口蹄疫病毒无毒株及O/A型口蹄疫二价灭活疫苗

权利要求书

1.FMDV全长cDNA感染性克隆质粒，其特征在于，FMDV基因组IRES的结构域4用牛鼻病毒IRES的结构域4进行替换，缺失FMDV非结构蛋白3A的84-143位氨基酸的编码区，用FMDV的3B3蛋白的编码区取代FMDV的3B1和3B2蛋白的编码区以及在FMDV结构蛋白P1编码区两侧引入Pst I酶切位点；FMDV的3B3蛋白的编码区的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.按照权利要求1所述的FMDV全长cDNA感染性克隆质粒，其特征在于，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。

3.由权利要求1或2所述的FMDV全长cDNA感染性克隆质粒采用反向遗传方法拯救获得的携带负标记的重组FMDV无毒株。

4.O型FMDV全长cDNA感染性克隆质粒，其特征在于，将权利要求1的FMDV全长cDNA感染性克隆质粒的结构蛋白P1编码区用O型FMDV的结构蛋白P1编码区替换；其中，将O型FMDV的结构蛋白VP2的第79位的酪氨酸突变为组氨酸以及将第93位的丝氨酸突变为酪氨酸。

5.按照权利要求4所述的O型FMDV感染性全长cDNA克隆质粒，其特征在于，其核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。

6.由权利要求4或5所述的O型FMDV感染性全长cDNA克隆质粒采用反向遗传方法拯救获得的具有耐热表型和3B表位缺失负标记的重组O型口蹄疫病毒无毒株。

7.A型FMDV全长cDNA感染性克隆质粒，其特征在于，将权利要求1的FMDV全长cDNA感染性克隆质粒的结构蛋白P1编码区用A型FMDV的结构蛋白P1编码区替换；其中，将A型FMDV的结构蛋白VP1的第3位的丙氨酸突变为苏氨酸以及将第17位的天冬酰胺突变为组氨酸。

8.按照权利要求7所述的A型FMDV感染性全长cDNA克隆质粒，其特征在于，其核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示。

9.由权利要求7或8所述的A型FMDV全长cDNA感染性克隆质粒采用反向遗传方法拯救获得的具有耐热表型和3B表位缺失负标记的重组A型口蹄疫病毒无毒株。

10.防治O型口蹄疫和A型口蹄疫的二价灭活疫苗，其特征在于，包括防治上有效量的权利要求6所述的重组O型口蹄疫病毒无毒株和权利要求9所述的重组A型口蹄疫病毒无毒株以及免疫佐剂。

11.权利要求3所述的重组FMDV无毒株在制备防治口蹄疫的药物中的用途或者用于制备鉴别诊断口蹄疫疫苗接种动物与自然感染动物的试剂中的用途。

12.权利要求6所述的重组O型口蹄疫病毒无毒株在制备防治O型口蹄疫的药物中的用途或者用于制备鉴别诊断口蹄疫疫苗接种动物与自然感染动物的试剂中的用途。

13.权利要求9所述的重组A型口蹄疫病毒无毒株在制备防治A型口蹄疫的药物中的用途或者用于制备鉴别诊断口蹄疫疫苗接种动物与自然感染动物的试剂中的用途。