[发明专利]一种水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法

权利要求书

1.一种水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、在待鉴定的wx^ha类低直链淀粉水稻品种后代群体移栽15～40天挂牌标记单株，提取标记单株叶片总DNA；

S2、用低直链淀粉含量调控基因wx^ha特异性引物wx-JD进行PCR扩增反应，所述低直链淀粉含量调控基因wx^ha特异性引物wx-JD由上游引物wx-JD-F和下游引物wx-JD-R组成，所述上游引物wx-JD-F的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物wx-JD-R的碱基序列如SEQ IDNO：2所示；

S3、PCR扩增反应产物加入6×DNA Loading Buffer后上样5μl，用3％的琼脂糖凝胶，加入GelStain染胶液，1×TAE buffer，160V～180V电泳60分钟；

S4、Bio-Rad GeoDoc XR+凝胶成像系统拍照，检测PCR扩增产物及电泳结果；

S5、PCR扩增产物分子量为101bp的材料为wx^ha类低直链淀粉水稻材料。

2.根据权利要求1所述的水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法，其特征在于，所述步骤S2中，PCR扩增反应的反应液组成为：

反应液组成：反应总体积为10μl，其中10×EasyTaq Buffer 1μl，2.5mM dNTPs 0.6μl，上游引物wx-JD-F 0.2μl，50μmol下游引物wx-JD-R 0.2μl，EasyTaq DNA Polymerase 0.15μl，100ng/μl模板DNA 0.6μl，ddH₂O 7.25μl。

3.根据权利要求1所述的水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法，其特征在于，所述步骤S2中，PCR扩增反应的扩增程序为：

扩增程序：94℃预变性5min；从94℃变性30s，58℃退火30s至72℃延伸15s，35个循环；72℃延伸5min。