[发明专利]一种水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法在审
申请号: | 202010781147.4 | 申请日: | 2020-08-06 |
公开(公告)号: | CN112029886A | 公开(公告)日: | 2020-12-04 |
发明(设计)人: | 赵国珍;吴志刚;陈于敏;邹茜;刘慰华 | 申请(专利权)人: | 云南省农业科学院粮食作物研究所 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/6858 |
代理公司: | 昆明盈正知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 53208 | 代理人: | 李岿 |
地址: | 650201 *** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 水稻 直链 淀粉 含量 调控 基因 引物 分子 鉴定 方法 | ||
本发明涉及水稻育种技术领域,具体涉及一种水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法。该方法对待鉴定wxha类低直链淀粉水稻品种后代群体移栽15~40天挂牌标记单株,提取标记单株叶片总DNA,用自主设计的wxha基因特异性引物wx‑JD进行PCR反应;用3%琼脂糖凝胶、GelStain染胶液、1×TAE buffer、160V~180v电泳60分钟,Bio‑Rad GeoDoc XR+凝胶成像系统拍照,依据电泳结果鉴定材料基因型,PCR产物分子量为101bp的是wxha类低直链淀粉水稻材料。本发明能快速、有效鉴别wxha类低直链淀粉水稻及其杂交组合后代的直链淀粉合成基因。
技术领域
本发明涉及水稻育种技术领域,具体涉及一种水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法。
背景技术
由于低直链淀粉优质软米的米饭质地柔软、富弹性、冷不回生,具有良好的食用价值和很高的经济价值,越来越受消费者和稻农喜爱,所以优质软米的选育已然受到世界各稻米生产国科研人员的高度重视。云南被称为“稻之王国”,具有丰富的软米种质,但主要是籼型软米,种植面积有限,而面积更广的粳稻区缺乏低直链淀粉的优质粳型软米。近二十年来,经过育种人员的不懈努力,育成了一系列的粳型低直链淀粉软米,包括银光、声农4号、楚粳39号、云粳37号、云粳46号、楚粳48号等品种或品系,填补了云南粳型软米的空白,深受省内外人民的喜爱,常年种植面积保持在五十多万亩。尤其是云粳37号,虽然还未通过审定,由于米质优异,目前在云南省内已有50余家种业和米业企业从事其生产和销售,其中不少份额销往北、上、广等大城市,部分零售价高达40元/公斤,促进了云南高原特色优质米产业的发展。然而传统育种方式费工费时,定向选育的准确性差,为加快云南优质粳型软米的更新换代,保障云南优质软米产业的持续发展,迫切需要开发上述软米的低直链淀粉分子标记,开展分子标记辅助选育(MAS)育种,加速定向选育优质粳型软米。另外,上述一些软米由于长期种植而又没有开展提纯复壮工作,其种性已严重退化,并出现严重混杂,开展提纯复壮和改良工作已迫在眉睫。我们研究发现银光、声农4号、楚粳39号、云粳37号、云粳46号、楚粳48号的低直链淀粉性状主要受第6号染色体上的单基因Wx控制,对该基因进行克隆分析找到了等位变异位点wxha,并根据其碱基差异设计了一个特异引物鉴定该低直链淀粉基因。
大量研究表明水稻直链淀粉含量的遗传机制较为复杂,除受主效基因控制外,还易受微效基因和环境因素的影响,因此对直链淀粉含量性状改良采用常规育种手段受限较大、耗时长、成本高。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提供一种性能可靠的水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法,结合了分子生物学手段从基因水平上对软米品种银光、声农4号、楚粳39号、云粳37号、云粳46号、楚粳48号的低直链淀粉基因wxha进行准确、快速、高效的鉴定。
本发明的技术方案是这样实现的:一种水稻低直链淀粉含量调控基因的单引物分子鉴定方法,包括以下步骤:
S1、在待鉴定的水稻品种云粳37号后代群体材料移栽15~40天挂牌标记单株,提取标记单株叶片总DNA;
S2、用低直链淀粉基因wxha的特异性引物wx-JD进行PCR扩增反应,所述低直链淀粉基因wxha特异性引物wx-JD由上游引物wx-JD-F和下游引物wx-JD-R组成,所述上游引物wx-JD-F的碱基序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物wx-JD-R的碱基序列如SEQ ID NO:2所示;
S3、PCR扩增反应产物加入6×DNA Loading Bffer后上样5μl,用3%的琼脂糖凝胶,加入GelStain染胶液,1×TAE buffer,160V~180V电泳50分钟;
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