[发明专利]一种沙门氏菌核酸检测质粒DNA参考样品、制备方法及其应用在审
| 申请号： | 202010781165.2 | 申请日： | 2020-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN111850150A | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 袁慕云;许龙岩;陈瑶;郝文波;刘二龙 | 申请（专利权）人： | 广州海关技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/10;C12N15/63;C12N15/31;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 张换君 |
| 地址： | 510623 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 沙门氏菌 核酸 检测 质粒 dna 参考 样品 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种沙门氏菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示；
其采用包含来源于不同沙门氏菌菌株的肠伤寒特异性序列se、鼠伤寒特异性序列st以及共有的aceA基因的片段插入质粒中形成；
所述se、st、aceA基因以1:1:1比例串联；
所述se、st、aceA基因间以不相关的基因片段进行隔开。
2.根据权利要求1所述的沙门氏菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，在260nm和280nm处的光密度值比值在1.8-2.0之间。
3.根据权利要求1所述的沙门氏菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，所述不相关的基因片段的核苷酸序列为aagtcg。
4.一种权利要求1-3任一项所述的沙门氏菌核酸检测质粒DNA参考样品的制备方法，其特征在于，包括：
人工合成沙门氏菌基因se、st、aceA，基因之间用所述不相关的基因片段间隔；
合成后克隆插入质粒中，经沙门氏菌扩增后，提取并提纯质粒；
测定浓度并分装；-70℃预冻，经升华和再干燥后，得到冻干粉，即所述沙门氏菌核酸检测质粒DNA参考样品。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述质粒为pUC57载体质粒。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括对核酸标准样品定性鉴定，通过特异性引物进行PCR扩增或测序进行定性分析，来确认所制备的质粒参考品包含完整和准确的目的DNA。
7.一种权利要求1-3任一项所述的沙门氏菌核酸检测质粒DNA参考样品在检测沙门氏菌中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，在进行沙门氏菌检测时，所述沙门氏菌核酸检测质粒DNA参考样品作为参考品或对照品。
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