[发明专利]一种用于鉴别暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀的特异性引物及其方法

说明书

本发明公开了一种用于鉴别暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀的特异性引物及其方法，所述特异性引物包括正向引物和反向引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示。其鉴别方法首先采集待鉴别的河鲀样品，提取基因组DNA；然后以三种河鲀鱼基因组DNA为模板，用引物对其进行PCR扩增；最后对扩增产物进行电泳并根据条带差异进行鉴定。利用本发明的特异性引物鉴别暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀的方法无需微卫星上机测序等复杂步骤，仅根据条带数量和位置即可快速准确的对三种鱼进行区分，具有稳定性好、实用性强、操作简单、准确率高等优点。

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种鉴别暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀的特异性引物及方法。

背景技术

暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）和红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）俗称河鲀，隶属于硬骨鱼纲（Osteichthyes），辐鳍鱼亚纲（Actinopterygii），鲀形目(Letrodontiforms )，鲀科( Tetraodontidae )，东方鲀属（Takifugu），国内主要分布在中国黄海、渤海及近海海域、江海湖泊。二者肉质鲜嫩腴美，营养价值高，深受广大消费者喜爱，是具有较高经济价值的水产品。

杂交育种通过将亲本基因型进行重新组合，使其后代可同时具有亲本的优良性状，甚至可能出现亲本不具备的一些形状特征，并具有一定的杂种优势。已报道的暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交产生的杂交东方鲀，既具有暗纹东方鲀的丰富风味，又具有红鳍东方鲀生长快速的特性。尽管三种东方鲀在成鱼时期外观体型差异较明显，凭肉眼即可区分，但三种鱼在稚、幼鱼时期，外观体型十分相似，无法用肉眼区分。此外，对于部分河鲀组织或者加工的肉制品等难以从外观对其区分。随着近些年来河鲀养殖面临着种质混杂、品质退化严重、无序杂交等突出问题，因此，亟需一种物种鉴定方法对暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀进行区分。

物种鉴定一直是分类学乃至几乎所有生物领域上至关重要的研究步骤。因此，准确的对物种鉴定和分类就显得尤其重要。作为第二代分子标记，微卫星具有多态性、杂合率高、共显性遗传等特点。近年来，河鲀物种中微卫星标记的开发主要应用于分析河鲀不同地理群体间遗传多样性、近缘物种间种质进化及物种鉴定等方面。但目前为止，关于东方鲀属属间物种鉴别的报道并不多，关于暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀鉴定的研究至今尚未见报道。传统利用微卫星标记技术鉴定物种的方法是在引物对的前引添加18bp特异荧光片段，并在PCR扩增体系中添加荧光试剂，对扩增后的PCR产物使用DNA测序仪ABI 3730xl进行毛细管荧光电泳检测，根据等位基因峰值读取微卫星位点基因型，检测不同物种间基因型的差异或不同引物的多态性。操作繁琐、费时、成本较高。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种有效区分暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀种间鉴定的特异性引物；该引物组可快速、精准地对三种东方鲀进行鉴定。

本发明还提供了所述的用于鉴别暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀的方法。

技术方案：为了实现上述目的，本发明所述一种用于鉴别暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀[暗纹东方鲀（♀）×红鳍东方鲀（♂），杂交东方鲀是由雌性暗纹东方鲀和雄性红鳍东方鲀杂交产生的杂交种]的特异性引物，所述特异性引物包括正向引物和反向引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示：

正向引物SEQ ID NO.1：5′-AAAGGGGAGTTTTTCCTTGCCACT-3′；

反向引物SEQ ID NO.2：5′-CCCACATTCTCTCCATCTCCTCCT-3′。

本发明所述用于鉴别暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀方法的试剂盒，其包括所述的特异性引物。