[发明专利]检测染色体非整倍体数目异常的PCR扩增组合物及检测试剂盒

说明书

本发明涉及检测染色体非整倍体数目异常的PCR扩增组合物及检测试剂盒，本发明的组合物能同时对16和22号染色体上19个STR位点进行复合扩增；本发明开发的人染色体数目异常的检测试剂盒，具体为针对产前诊断和自然流产分析的常见数目异常的染色体，即16和22号染色体，应用定量荧光PCR结合毛细管电泳技术，开发出适用中国人群的STR基因分析的一种自动化，高通量，低成本的快速检测试剂盒。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，多重荧光PCR技术结合毛细管电泳法对特异性STR位点实现对常见的16和22号染色体数目异常进行检测。

背景技术

自然流产是妊娠常见并发症，导致自然流产的原因较多，如遗传、免疫、内分泌异常、感染、解剖异常、环境等因素。50％以上的早期自然流产是由于胚胎染色体异常造成的，其中染色体数目异常占96％，结构异常仅3％左右，常染色体三体和性染色体单体占胚胎染色体异常86％以上。染色体异常中，以16、22、21、13和18三体多见，其次为X单体、多倍体和镶嵌体。分析绒毛染色体核型可找到半数以上自然流产原因，避免孕妇不必要的检查和治疗，同时有效地提供生育指导。

细胞遗传学染色体核型分析是目前产前诊断的金标准，通过妊娠不同时期采取绒毛、羊水及胎儿血细胞为标本，制备染色体核型进行分析。然而，染色体核型分析存在细胞培养周期时间长，有培养失败的风险。

荧光原位杂交(FISH)不需细胞培养，利用已知核酸序列作为探针，以荧光素直接标记或以非放射性物质标记后与靶DNA进行杂交。再通过免疫细胞化学过程连接上荧光素标记物，最后在荧光显微镜下观察杂交信号从而对标本中待测核酸进行定性、定位和定量分析。该方法成本较高，周期长，对操作人员要求较高的特点，同时结果为图片，需要人工判读或干预，难以实现自动化和高通量分析。

QF-PCR技术是通过荧光引物对样本DNA的不同区域进行PCR扩增，采用毛细管电泳对扩增片段进行分离，通过荧光检测系统确定扩增片段的长度并实现对多态性位点的分型，通过对扫描软件对预期大小的扩增产物对应等面积定量，实验对原始模板的定量。

目前，针对人类染色体16和22号染色体异常的临床检测，专利CN 201810732477主要针对4、13、15、16、18、21、22、X和Y染色体数目异常检测检测，但是所检测STR位点较少。

发明内容：

本发明的目的是提供检测染色体非整倍体数目异常的PCR扩增组合物，能同时对16和22号染色体STR位点进行复合扩增，对16和22号染色体非整倍体数目异常进行检测。

本发明的另一个目的在于提供一种染色体非整倍体数目异常的检测试剂盒，该试剂盒利用多重定量荧光PCR扩增体系，可实现对样品稳定、准确的检测。

检测染色体非整倍体数目异常的PCR扩增组合物，其特征在于：包括19对特异引物，能同时扩增19个来自16号和22号染色体特异性STR位点，所述位点及其引物对序列如下表：

其中被扩增的19个位点分别由四种颜色的荧光标记组成，相同的荧光标记视为同一组，四组组合分别为：D16S3391、D16S771、D16S2640、D16S2624、D16S537为第一组；D16S768、D16S3253、D16S539、D16S753、D16S3255、D16S767为第二组；D22-GATA198B05、D22S534、D22S685、D22S689为第三组；D22_3、D22_2、D22_4、D22S445为第四组。

所述第一组采用FAM标记，第二组采用HEX标记，第三组采用TAMRA标记，第四组采用ROX标记，所述荧光标记位于特异性引物对中其中一条引物的5’端。

染色体非整倍体数目异常检测试剂盒，包括上述扩增组合物。

所述位点扩增的引物对浓度为：