[发明专利]一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法

权利要求书

1.一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，其特征在于：该测定方法包括以下步骤：

步骤一：阿糖胞苷储备液配制，分别精密称量阿糖胞苷对照品2份，并用50％乙腈溶解摇匀、配制成浓度1.000mg/mL的阿糖胞苷储备液，分别标记为阿糖胞苷-STD-Stock，阿糖胞苷-QC-Stock；

步骤二：阿糖尿苷储备液配制，分别精密称量阿糖尿苷对照品2份，用50％乙腈溶解摇匀、配制成浓度1.000mg/mL的阿糖尿苷储备液，分别标记为阿糖尿苷-STD-Stock，阿糖尿苷-QC-Stock；

步骤三：工作液配制，工作液分为标准曲线工作液和质控工作液，标准曲线工作液以阿糖胞苷-STD-Stock和阿糖尿苷-STD-Stock为起始溶液，以超纯水为稀释溶剂逐级稀释得到阿糖胞苷和阿糖尿苷的各级标准曲线工作液；质控工作液以阿糖胞苷-QC-Stock和阿糖尿苷-QC-Stock为起始溶液，以超纯水为稀释溶剂逐级稀释得到阿糖胞苷和阿糖尿苷的各级质控工作液；

步骤四：标准曲线和质量控制样本的配制，吸取90％体积的人空白血清，加入10％体积的步骤三中各级标准曲线和各级质控浓度的工作液，得到曲线样本和质量控制样本；

步骤五：内标工作液的配制，用超纯水氘代阿糖胞苷对照品，用超纯水作为稀释液稀释得到内标工作液浓度为100.0ng/mL；

步骤六：样品预处理，取150μL血浆样品于96孔板离心管中，加入步骤五中的内标溶液30μL，加入沉淀剂甲醇450μL，涡旋10min，高速离心(4000rpm)15分钟；

步骤七：LC-MS/MS分析过程，通过LC-MS/MS系统对步骤六中提取的上清液进行分析，得到阿糖胞苷和阿糖尿苷的质谱和色谱分析表；

步骤八：对照验证，将步骤七中得到的色谱和质谱分析结果与步骤四中得到的各级样本进行对比，按照中国药典2015版《生物样品定量分析方法验证指导原则》的要求，对本方法进行了验证。

2.根据权利要求1所述的一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，其特征在于：步骤七中所述上清液为步骤五离心后得到，取上清液250μL于另一96深孔板中进行LC-MS/MS分析，进样体积为0.5μL。

3.根据权利要求1所述的一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，其特征在于：步骤七中所述LC-MS/MS系统由AB SCIEX QTRAP 5500型三重四极杆串联质谱仪、高压泵、在线脱气机、自动进样器以及柱温箱组成。

4.根据权利要求1所述的一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，其特征在于：步骤八中所述验证内容包括选择性、标准曲线、定量下限、精密度和准确度、提取回收率、基质效应、稀释效应、残留效应、稳定性和样本容量。

5.根据权利要求1所述的一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，其特征在于：步骤一和步骤二中得到的所述阿糖胞苷-STD-Stock、阿糖胞苷-QC-Stock、阿糖尿苷-STD-Stock和阿糖尿苷-QC-Stock均处于4℃的环境中储存。