[发明专利]一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法

说明书

本发明涉及医疗检测技术领域，具体为一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，包括步骤一：阿糖胞苷储备液配制；步骤二：阿糖尿苷储备液配制；步骤三：工作液配制；步骤四：标准曲线和质量控制样本的配制；步骤五：内标工作液的配制；步骤六：样品预处理；步骤七：LC‑MS/MS分析过程；步骤八：对照验证，有益效果为：本发明采用的检测方法可同时测定阿糖胞苷和阿糖尿苷人血浆中血药浓度，采用蛋白沉淀法处理样本，操作方便，灵敏度高，测量精确，方法稳定可靠；通过设置同步测定的方式能满足临床大批量样本检测需求，同时通过设置标准曲线和样本，实现分级对比，可清楚直观的了解到测定的范围。

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，具体为一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法。

背景技术

阿糖胞苷是一种主要作用于细胞S增殖期的嘧啶类抗代谢药物，用于治疗多种类型的白血病，包括急性粒细胞白血病和脑膜白血病，目前，药物药代动力学以及生物等效性的研究均通过测定药物的药动学参数来评价。因此，同时测定人血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的血药浓度，对于合理使用阿糖胞苷具有重要意义。

LC-MS/MS法测定人血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的浓度，该方法要么灵敏度低、分析时间长、要么用样量多、线性范围窄、或是只测阿糖胞苷单个分析物浓度，无法满足大批量样本生物分析同时检测阿糖胞苷和阿糖尿苷血药浓度的需要，LC-MS/MS法由于具有特异性好和灵敏度高等诸多优点，是小分子药物生物分析的首选方法。

为此提供一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，以解决血浆测定的灵敏度、便捷性和成本问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷的方法，该测定方法包括以下步骤：

步骤一：阿糖胞苷储备液配制，分别精密称量阿糖胞苷对照品2份，并用50％乙腈溶解摇匀、配制成浓度1.000mg/mL的阿糖胞苷储备液，分别标记为阿糖胞苷-STD-Stock，阿糖胞苷-QC-Stock；

步骤二：阿糖尿苷储备液配制，分别精密称量阿糖尿苷对照品2份，用50％乙腈溶解摇匀、配制成浓度1.000mg/mL的阿糖尿苷储备液，分别标记为阿糖尿苷-STD-Stock，阿糖尿苷-QC-Stock；

步骤三：工作液配制，工作液分为标准曲线工作液和质控工作液，标准曲线工作液以阿糖胞苷-STD-Stock和阿糖尿苷-STD-Stock为起始溶液，以超纯水为稀释溶剂逐级稀释得到阿糖胞苷和阿糖尿苷的各级标准曲线工作液；质控工作液以阿糖胞苷-QC-Stock和阿糖尿苷-QC-Stock为起始溶液，以超纯水为稀释溶剂逐级稀释得到阿糖胞苷和阿糖尿苷的各级质控工作液；

步骤四：标准曲线和质量控制样本的配制，吸取90％体积的人空白血清，加入10％体积的步骤三中各级标准曲线和各级质控浓度的工作液，得到曲线样本和质量控制样本；

步骤五：内标工作液的配制，用超纯水氘代阿糖胞苷对照品，用超纯水作为稀释液稀释得到内标工作液浓度为100.0ng/mL；

步骤六：样品预处理，取150μL血浆样品于96孔板离心管中，加入步骤五中的内标溶液30μL，加入沉淀剂甲醇450μL，涡旋10min，高速离心(4000rpm)15分钟；

步骤七：LC-MS/MS分析过程，通过LC-MS/MS系统对步骤六中提取的上清液进行分析，得到阿糖胞苷和阿糖尿苷的质谱和色谱分析表；

步骤八：对照验证，将步骤七中得到的色谱和质谱分析结果与步骤四中得到的各级样本进行对比，按照中国药典2015版《生物样品定量分析方法验证指导原则》的要求，对本方法进行了验证。