[发明专利]一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法

权利要求书

1.一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)孢子悬浮液的配制：将样本菌培养制备孢子悬浮液备用；

(2)玉米抗性资源的准备：种植玉米，待玉米长至6～8叶期接种；

(3)接种：用注射器在距离地面1 .2～1 .7cm、注射器针头与茎成45°插入到茎的中心位置并缩回0 .18～0 .22cm后，注入1 .4～1 .6ml步骤(1)所述孢子悬浮液；

(4)统计数据：待接种25d后，统计植株发病情况，计算病情指数，并按病情指数确定抗感类型；

步骤(1)样本菌的来源：市售代表菌株或经组织分离法对病株组织分离培养鉴定得到；

所述组织分离法对病株分离培养：取病健交接部分的组织，置于酒精中浸泡，取出置于升汞中浸泡，再经无菌水换洗，晒干后转移至PDA平板上封口，置于25～27℃环境，黑暗培养2～3d，挑取菌落进行纯化，备用；

所述酒精为质量体积比75％酒精，浸泡时间2～3s，所述升汞质量体积比0 .1％，浸泡时间2～3min；

步骤(1)培养的具体步骤依次为：将样本菌株在PDA培养基上培养5～7d；更换培养基接种并培养5d后用无菌水冲洗得孢子悬浮液并用双层纱布过滤；调整孢子悬浮液浓度为1×10⁶孢子/ml；

所述更换培养基：更换为高粱培养基，所述高粱培养基的制备方法：将高粱粒用水于100℃加热20min；再转移至三角瓶中经121℃、时间45min灭菌；

所述接种并培养5d后用无菌水冲洗得孢子悬浮液：每个三角瓶中接种5～7个直径7mm菌碟；置于26℃环境黑暗培养，每天振荡三角瓶1～2次；待菌丝长满每个高粱粒的表面，用无菌水冲洗带菌的高粱粒得孢子悬浮液。

2.如权利要求1所述的一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述种植玉米：5月初，将待检测当地优势种植的玉米品种或品系种植到田间，每个玉米品种或品系3次重复，随机排列在田间，每个重复30株。

3.如权利要求2所述的一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法，其特征在于，步骤(3)所述注射器为耐尔尼三用注射器，并调节注射器每次注射量为1 .5ml。