[发明专利]一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法

说明书

本发明公开了一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法。属于农业技术领域。包括下列步骤：孢子悬浮液的配制、玉米抗性资源的准备、接种和统计数据；其中，接种：用注射器在距离地面1.2～1.7cm、注射器针头与茎成45°插入到茎的中心位置并缩回0.18～0.22cm后，注入1.4～1.6ml孢子悬浮液；拔出针头，正常管理和统计数据；统计数据：待接种25d后，统计植株发病情况，计算病情指数，并按病情指数确定抗感类型。本发明省时、省力、接种速度快，适合大量玉米抗性材料的筛选和调查。

技术领域

本发明涉及农业技术领域，更具体的说是涉及一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法。

背景技术

玉米(Zea mays L.)是一种重要的粮食作物和饲料，在全球20多个国家为3.1亿人提供食物，占人类饮食总热量的20～30％。可靠的玉米生产是维持中国粮食安全和农业稳定的必要条件。然而，由各种病原菌引起的玉米茎腐病是世界上大多数玉米产区发生的最具破坏性的病害之一。玉米茎腐病是造成许多国家玉米产量和品质严重下降的原因，并已成为中国玉米生产的主要挑战之一。选育和利用抗病品种是最有效最经济的方法。而抗病品种的选育和筛选主要通过人工接种进行抗病性鉴定，适合的接种方法是非常关键的。

但是，国内外对玉米茎腐病的人工接种尚无统一的标准。常用的接种方法有埋入法、牙签法、钻孔法和注射法。这些方法中应用最多的人工接种的方法是根埋法，而埋根法发病率低，受环境影响大，接种效果稳定性差，且准备接种体和接种过程复杂工作量大。也有牙签法，其准备阶段工作量大，接种量不容易控制，不适合作大量的玉米抗性资源的鉴定。传统的已经报道的注射法是采用普通注射器接种，接种时期为玉米生长中后，用电钻将根茎部打孔后，用注射器将菌悬液注射到茎部，用凡士林堵住接种部位，该方法工作量大，后期发病不容易调查。目前，所报道的接种方法，均不适合大批量抗性材料的鉴定，

因此，提供一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法，适合大量玉米抗性材料的筛选和调查是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种玉米品种抗茎基腐病人工接种鉴定方法，包括下列步骤：

(1)孢子悬浮液的配制：将样本菌培养制备孢子悬浮液备用；

(2)玉米抗性资源的准备：种植玉米，待玉米长至6～8叶期接种；

(3)接种：用注射器在距离地面1.2～1.7cm、注射器针头与茎成45°插入到茎的中心位置并缩回0.18～0.22cm后，注入1.4～1.6ml步骤(2)所述孢子悬浮液；

(4)统计数据：待接种25d后，统计植株发病情况，计算病情指数，并按病情指数确定抗感类型。

有益效果在于，通过优选接种位置有利于悬浮液注射，避免堵塞针头。有利于为后期的统计分析工作打下坚实的鸡翅。；

优选的：步骤(1)样本菌的来源：市售代表菌株或经组织分离法对病株组织分离培养鉴定得到。

优选的：组织分离法对病株分离培养：取病健交接部分的组织，置于酒精中浸泡，取出置于升汞中浸泡，再经无菌水换洗，晒干后转移至PDA平板上封口，置于25～27℃环境，黑暗培养2～3d，挑取菌落进行纯化，备用。

有益效果在于：采取上述措施可以快速杀死表面杂菌，不影响真正病原菌分离，且简单和快捷。

优选的：酒精为质量体积比75％酒精，浸泡时间2～3s，所述升汞质量体积比0.1％，浸泡时间2～3min。

有益效果在于：处理时间过长，会把组织内的病原菌也都杀死，无法分离玉米茎基腐病菌，处理时间过短，组织表面的杂菌杀不死，无法分出真正的病原菌。