[发明专利]植物瞬时表达载体的构建及应用

权利要求书

1.植物瞬时表达载体，其特征在于，包括5’UTR区域、MCS区域和SEKDEL序列。

2.如权利要求1所述的植物瞬时表达载体，其特征在于，所述5’UTR区域、MCS区域和SEKDEL序列的序列如SEQ ID No.1所示。

3.如权利要求1或2所述的植物瞬时表达载体，其特征在于，其以植物表达载体pEAQ为基本骨架。

4.如权利要求1至3任一项所述的植物瞬时表达载体，其特征在于，还包括目的基因，所述目的基因的N端增加PacI酶切位点，C端增加XhoI酶切位点。

5.如权利要求2至4任一项所述的植物瞬时表达载体，其特征在于，其构建方法中，采用如SEQ ID No.2所示的上游引物和如SEQ ID No.3所示的下游引物扩增如SEQ ID No.1所示的序列。

6.如权利要求5所述的植物瞬时表达载体，其特征在于，所述扩增的扩增体系包括22μlddH₂O、25μl KOD OneTM PCR MasterMix、1μl 10μM如SEQ ID No.2所示的上游引物、1μl 10μM如SEQ ID No.3所示的下游引物、1μl 100ng/μl的含有人工合成序列SEQ ID No.1的质粒模板。

7.如权利要求5或6所述的植物瞬时表达载体，其特征在于，所述扩增的程序为：98℃30秒；28个循环：98℃10秒；55℃30秒；68℃10秒；68℃5分钟；4℃10分钟。

8.如权利要求1至7任一项所述的植物瞬时表达载体在表达外源蛋白中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述外源蛋白包括GFP。

10.植物瞬时表达载体表达外源蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：构建如权利要求1所述的植物瞬时表达载体；

步骤2：在步骤1制得的所述植物瞬时表达载体中插入外源蛋白的基因；获得重组质粒；

步骤3：取步骤2制得的重组质粒转化入宿主感受态中，培养，收集菌液，浸润植物叶片，提取蛋白。