[发明专利]一种促进大鼠放射状胶质细胞向神经元分化的方法

权利要求书

1.一种促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：包括，

获取胎鼠大脑皮质的细胞悬液，制备RGCs单细胞；

将所述RGCs单细胞接种于培养板，用RGCs培养液培养过夜，用RGCs诱导分化液继续培养即可。

2.如权利要求1所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：所述制备RGCs单细胞，其为用RGCs培养液重悬细胞，形成肉眼可见的悬浮的细胞球后更换RGCs培养液，继续培养5～7d，得到细胞球；用Accutase酶处理所述细胞球，消化成单个细胞，继续悬浮培养，传代即可。

3.如权利要求2所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：所述培养，其按1×10⁵个/ml的密度接种于10mlRGCs培养液中。

4.如权利要求2任一所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：所述传代，其为传代3代以上。

5.如权利要求1～4任一所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：所述RGCs培养液，其每100ml为DMEM/F12基础培养液97ml，EGF 2ug，bFGF 2ug，B272 ml，100×PS 1ml。

6.如权利要求1～4任一所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：所述RGCs诱导分化液，其每100ml为DMEM/F12基础培养液97ml，FBS 2ml，BDNF2ug，GDNF 2ug，100×PS 1ml。

7.如权利要求6所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：所述将所述RGCs单细胞接种于培养板，其接种密度为按2×10⁴个/孔的密度进行。

8.如权利要求1～4或7任一所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：所述获取胎鼠大脑皮质的细胞悬液，其为取孕14d SD大鼠1只，用复合麻醉剂Chlorpent 0.4ml/100g经腹腔麻醉后，无菌条件下打开腹腔，置于含有预冷DMEM/F12基础培养液的培养皿中；取出胎鼠全脑组织，将皮质剪碎成1mm³大小的组织块；将皮质组织块移至盛有适量基础培养液的离心管内，机械轻轻吹打至无明显组织块，用无菌200目尼龙网过滤，收集过滤后的细胞悬液。

9.如权利要求8所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：相比于自然分化，所述方法可提高大鼠胚胎大脑皮质来源的放射状胶质细胞向神经元分化率的3倍以上。