[发明专利]一种促进大鼠放射状胶质细胞向神经元分化的方法

说明书

本发明公开了一种促进大鼠放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其中，一种促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其包括，获取胎鼠大脑皮质的细胞悬液，制备RGCs单细胞；将所述RGCs单细胞接种于培养板，用RGCs培养液培养过夜，用RGCs诱导分化液继续培养即可。所述制备RGCs单细胞，其为用RGCs培养液重悬细胞，形成肉眼可见的悬浮的细胞球后更换RGCs培养液，继续培养5～7d，得到细胞球；用Accutase酶处理所述细胞球，消化成单个细胞，继续悬浮培养，传代即可。本方法可明显提高大鼠胚胎大脑皮质来源的放射状胶质细胞向神经元分化的比例，可达自然分化率的3倍左右甚至更高。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种促进大鼠放射状胶质细胞向神经元分化的方法。

背景技术

神经退行性疾病的重要病理学基础是神经元在局部区域变性坏死，造成神经环路破坏或神经递质丢失。目前，临床上治疗这类疾病的主要方法是补充缺少的神经递质，但这并不能从根本上解决神经元变性坏死的问题。利用具有多向分化潜能的神经干细胞(Neural stem cells，NSCs)进行替代治疗被认为是较为理想的方法，可是在体内、外的自然分化条件下，NSCs分化成神经元的数量极少，这就需要引导NSCs分化成足够量的神经元，以满足治疗的需要。研究表明，在胚胎时期大脑皮质中大量分布的放射状胶质细胞(Radialglial cells，RGCs)属于初级NSCs，是神经元和神经胶质细胞共同的前体细胞，可以作为研究NSCs分化的理想细胞模型。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。本发明提供了将大鼠胚胎大脑皮质来源的放射状胶质细胞分化为成熟神经元的方法。

因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种促进大鼠放射状胶质细胞向神经元分化的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法，其特征在于：包括，

获取胎鼠大脑皮质的细胞悬液，制备RGCs单细胞；

将所述RGCs单细胞接种于培养板，用RGCs培养液培养过夜，用RGCs诱导分化液继续培养即可。

作为本发明所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法的优选方案，其中：所述制备RGCs单细胞，其为用RGCs培养液重悬细胞，形成肉眼可见的悬浮的细胞球后更换RGCs培养液，继续培养5～7d，得到细胞球；用Accutase酶处理所述细胞球，消化成单个细胞，继续悬浮培养，传代即可。

作为本发明所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法的优选方案，其中：所述培养，其按1×10⁵个/ml的密度接种于10ml RGCs培养液中。

作为本发明所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法的优选方案，其中：所述传代，其为传代3代以上。

作为本发明所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法的优选方案，其中：所述RGCs培养液，其每100ml为DMEM/F12基础培养液97ml，EGF 2ug，bFGF 2ug，B272 ml，100×PS 1ml。

作为本发明所述的促进大鼠胚胎放射状胶质细胞向神经元分化的方法的优选方案，其中：所述RGCs诱导分化液，其每100ml为DMEM/F12基础培养液97ml，FBS 2ml，BDNF2ug，GDNF 2ug，100×PS 1ml。