[发明专利]一种复合菌发酵饲料中乳酸菌及酵母菌计数用培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种复合菌发酵饲料中乳酸菌及酵母菌计数用培养基及其制备方法和应用，该培养基包括以下质量或体积浓度组分：有机物28‑35g/L、番茄汁50‑100ml/L、无机盐2‑3.5g/L，X‑gal 1ml/L，琼脂15‑18g/L，该培养基的pH值为5‑6，该培养基通过以下方法制得：(1)按浓度份，将有机物、无机盐和琼脂加入到蒸馏水中，并定容；(2)用盐酸将培养基pH调节至5‑6，并高压灭菌；(3)培养基冷却，按浓度份，在无菌环境中加入X‑gal及番茄汁，摇匀，得到复合菌发酵饲料中乳酸菌及酵母菌计数用培养基。本发明可以将酵母菌与乳酸菌分别计数，有效抑制芽孢菌在该琼脂上的生长而影响乳酸菌及酵母菌的计数结果。

技术领域

本发明涉及菌落计数培养基领域，具体涉及一种复合菌发酵饲料中乳酸菌及酵母菌计数用培养基及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，抗生素带来的负面问题日益严重，新抗生素的开发严重滞后。寻找替抗产品迫在眉睫，益生菌作为替抗产品之一，有着举足轻重的地位。

发酵饲料是以配合饲料为发酵底物，选择接种特定的有益微生物，人工控制温度、水分、需氧量等条件，通过微生物自身繁殖和代谢来生产的富含高活性益生菌及其代谢产物的饲料。评价发酵饲料的品质可以从多方面入手，其中重要一项就是发酵饲料中的活菌数。在发酵饲料中含有大量芽孢菌(枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌)、乳酸菌以及酵母菌等有益菌，测定它们的含量即可得出发酵饲料中的活菌量。

平板稀释法是测定饲料中芽孢菌、乳酸菌、酵母菌含量的常用方法，过程涉及3种不同平板，利用LB琼脂平板来测定芽孢菌，利用MRS琼脂来测定乳酸菌，利用YPD琼脂来测定酵母菌。传统的测定方法需要配置3种不同的培养基，准备工作量大繁杂，并且效率底，其中乳酸菌及酵母菌在MRS与YPD培养基中生长过程缓慢一般需要48h左右，且由于芽孢菌的生长较快，易在MRS琼脂、YPD琼脂培养基中生长，即使在厌氧条件下，当培养时间足够长时，同样会影响乳酸菌以及酵母菌的计数结果。因此，为了准确得到活菌量，在对发酵饲料进行菌量检测时，寻找一种合适的多用培养基是必需的。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可以将酵母菌与乳酸菌分别计数，可以有效抑制芽孢菌在该琼脂上的生长，避免由于芽孢菌的生长而影响乳酸菌及酵母菌的计数结果的复合菌发酵饲料中乳酸菌及酵母菌计数用培养基及其制备方法和应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种复合菌发酵饲料中乳酸菌及酵母菌计数用培养基，该培养基包括以下质量或体积浓度组分：有机物28-35g/L、番茄汁50-100ml/L、无机盐2-3.5g/L、X-gal 1ml/L、琼脂15-18g/L，该培养基的pH值为5-6。

进一步地，所述的有机物包括胰蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉或葡萄糖中的一种或多种。

若选择胰蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉和葡萄糖，它们的质量浓度之比为(6-8):(6-7):(4-5):(12-15)。

进一步地，所述的无机盐包括磷酸氢二钾、硫酸镁或硫酸锰中的一种或多种。

若选择磷酸氢二钾、硫酸镁和硫酸锰，它们的质量浓度之比为(2-3):(0.2-0.4):(0.03-0.05)。

进一步地，所述的番茄汁采用以下方法制得：将新鲜的番茄清洗切碎，添加灭菌水，然后进行温煮，过滤，之后保存备用。

进一步地，所述的灭菌水与番茄的质量比为(0.5-2):1；所述的温煮的温度45-55℃，时间为10-15min；所述的保存的温度为1-5℃。

进一步地，该培养基的pH值为5.5。