[发明专利]一种猪蓝耳病亚单位疫苗及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及基因工程领域及兽医生物制药领域，具体公开了一种猪蓝耳病亚单位疫苗及其制备方法与应用。本发明首先提供一种融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，接着提供一种猪蓝耳病亚单位疫苗，其包括所述融合蛋白。该猪蓝耳病亚单位疫苗中的融合蛋白是将进行密码子优化后的PRRSV NADC30‑like毒株的ORF5全长基因与去除DomainⅢ结构域的绿脓杆菌的基因融合表达，利用昆虫杆状病毒/昆虫细胞表达系统来获得的。本发明疫苗的保护效果好，能够诱导有效的体液免疫和细胞免疫，适合用于临床对蓝耳病的预防。

技术领域

本发明涉及基因工程领域及兽医生物制药领域，具体地说，涉及一种猪蓝耳病亚单位疫苗及其制备方法与应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征是PRRSV引起的高度传染性的疾病，能够引起母猪繁殖障碍、各年龄段猪呼吸道症状、仔猪高死亡率等，是造成养猪业严重经济损失的重要疾病之一。目前市场上针对该病防疫的疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗。灭活疫苗安全性高但不能很好地诱导细胞免疫，弱毒疫苗免疫保护效果良好但存在散毒和返强风险。而亚单位疫苗预期能够起到较好的预防作用。

新发流行毒株NADC30-like，可引起猪场免疫猪蓝耳病发病，相比高致病性PRRSV，NADC30-like毒力相对温和，能够引起经典毒株的致病症状和30％-50％的死亡率，其基因序列上与美国NADC30毒株高度同源，也因此得名NADC30-like。现市场上并无针对该毒株的相关疫苗，已有的蓝耳病疫苗并不能对该毒株引起的蓝耳病爆发起到很好的防御作用。

PRRSV基因组包含8个开放阅读框，编码的重要结构蛋白主要是ORF5、ORF6、ORF7，分别编码GP5蛋白(又名E蛋白)、M蛋白和N蛋白。GP5蛋白不仅能同时诱导细胞免疫应答和体液免疫应答。而且在蛋白的表面还带有中和位点。但GP5蛋白是PRRSV的主要囊膜糖蛋白，是变异性最明显的蛋白之一，欧洲株和北美株基因亚型之间的序列同源性只有51％-55％，即使在同一个基因亚型毒株之间，同源性也仅为94％左右。因此，针对不同的毒株，需要有针对性的研究相关疫苗。

现有技术中已有的猪蓝耳病疫苗设计方案有：“能够诱导针对猪蓝耳病毒的免疫应答的亚单位疫苗(申请号201610333073.1)”、“一种蓝耳病亚单位疫苗的制备(申请号201310190308.2)”和“重组质粒、重组病毒载体、重组病毒毒株及其应用、重组蛋白及含有该蛋白的亚单位疫苗(申请号201510257656.6)”。以它们思路所设计的疫苗对于机体细胞免疫反应的刺激仍有待进一步提升。

因此，有必要对猪蓝耳病亚单位疫苗的构建进行进一步研究。

发明内容

针对现有技术的问题，本发明的目的是提供一种保护效果良好，适合用于临床对猪蓝耳病预防的疫苗。

为了实现该目的，本发明的技术方案如下：

本发明首先提供一种融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供一种融合蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。该编码基因编码上述融合蛋白。

本发明另提供一种含有上述编码基因的生物材料，所述生物材料包括重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、噬菌体载体、病毒载体或工程菌。

本发明又提供一种上述融合蛋白或编码基因或生物材料在制备猪蓝耳病亚单位疫苗中的应用。

本发明再提供一种猪蓝耳病亚单位疫苗，其有效成分为上述融合蛋白。

本发明还提供一种猪蓝耳病亚单位疫苗的制备方法，其包括将上述融合蛋白与佐剂混合的步骤。

其中，所述融合蛋白的制备方法包括：

(1)将PRRSV NADC30-like毒株的ORF5全长基因序列进行密码子优化；