[发明专利]一种细胞培养基及细胞培养方法

权利要求书

1.一种细胞培养基，其特征在于，包括：培养液、角蛋白颗粒和血清，其中，所述血清为牛血清或自体血清。

2.根据权利要求1所述的细胞培养基，其特征在于，所述血清的浓度为2-5％，所述角蛋白颗粒在所述细胞培养基中的浓度为0.1-1％。

3.根据权利要求1所述的细胞培养基，其特征在于，所述角蛋白颗粒的粒径为20-40μm。

4.根据权利要求1所述的细胞培养基，其特征在于，还包括壳聚糖，所述壳聚糖在所述细胞培养基中的浓度为0-1％。

5.根据权利要求1所述的细胞培养基，其特征在于，还包括胶原蛋白，所述胶原蛋白在所述细胞培养基中的浓度为0-1％。

6.根据权利要求1所述的细胞培养基，其特征在于，所述培养液为DMEM培养液，所述DMEM培养液包括以下质量份数的组分：DMEM干粉90-110份、碳酸氢钠30-50份、青霉素1-5份、链霉素1-5份、HEPES30-50份和L-谷氨酰胺1-5份。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的细胞培养基，其特征在于，所述细胞培养基的酸碱度为5.0-7.2；

优选地，所述细胞培养基为成纤维细胞的培养基。

8.一种细胞培养方法，其特征在于，包括：

取出皮肤组织块，对所述皮肤组织块进行冲洗处理后转移至培养皿中，加入消化液，过夜；

对所述皮肤组织块依次进行去皮、消化、离心处理，加入权利要求1-7任意一项所述的细胞培养基悬浮细胞，并将细胞接种在培养皿中，获得原代培养的成纤维细胞；

在所述成纤维细胞扩增达到预设数量的情况下，对所述成纤维细胞进行冲洗、消化、离心处理，加入权利要求1-7任意一项所述的细胞培养基；

在所述细胞培养基中按照1:2-1:5的比例对所述成纤维细胞进行传代培养。

9.根据权利要求8所述的细胞培养方法，其特征在于，对所述皮肤组织块进行冲洗处理后转移至培养皿中，加入消化液，过夜，包括：

将所述皮肤组织块冲洗3遍，去掉脂肪和血液，转移至培养皿中，加入0.25％中性蛋白酶消化液4℃过夜；

其中，所述0.25％中性蛋白酶消化液通过将中性蛋白酶溶解至磷酸缓冲盐溶液中，并将酸碱度调至7.4获得；

对所述皮肤组织块进行消化处理，包括：

在培养皿中加入0.1％Ⅰ型胶原酶消化液，37℃消化；

其中，所述0.1％Ⅰ型胶原酶消化液通过将Ⅰ型胶原酶溶解至磷酸缓冲盐溶液中，并将酸碱度调至7.4获得。

10.根据权利要求8所述的细胞培养方法，其特征在于，在所述成纤维细胞扩增达到预设数量的情况下，对所述成纤维细胞进行冲洗、消化、离心处理，包括：

在所述成纤维细胞扩增至培养皿面积的70-80％的情况下，弃去上清液，采用磷酸盐缓冲溶液冲洗细胞，加入0.25％胰蛋白酶消化至细胞收缩呈圆球形，离心并收集细胞；

其中，所述0.25％胰蛋白酶通过将胰蛋白酶溶解至磷酸缓冲盐溶液中，并将酸碱度调至7.4获得。