[发明专利]一种细胞培养基及细胞培养方法

说明书

本申请提供一种细胞培养基及细胞培养方法。细胞培养基包括培养液、角蛋白颗粒和血清，其中，所述血清为牛血清或自体血清。本申请提供的细胞培养基，可以从营养、凋亡、空间三个方面发挥作用，促进细胞的增殖和生长，提高细胞的增殖数量和成活率，提高细胞的培养效果。本申请提供提供的细胞培养方法，分别采用本申请所述的细胞培养基对成纤维细胞进行原代培养和传代培养，可以有效提高成纤维细胞的增殖数量和成活率，提高成纤维细胞的培养效果。

技术领域

本申请涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种细胞培养基及细胞培养方法。

背景技术

成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，细胞呈梭形或扁形的星状，具有突起。自体真皮成纤维细胞注射移植是整形外科治疗凹陷和填充皱纹的一种新型方法，对于上述方法而言，前期工作培养足够数量的成纤维细胞是至关重要的。

目前，在成纤维细胞的培养过程中采用的培养基通常有两种，其一是采用含有牛血清的培养基对成纤维细胞进行培养，但是，牛血清的加入会带来异种血清免疫原性、携带的病原体和伦理学等众多相关问题；其二是采用无血清培养基对成纤维细胞进行培养，然而由于血清可以提供细胞生长所需的营养元素、激素以及细胞因子等，是细胞生长过程中不可或缺的一部分，血清的缺少必然会影响成纤维细胞的生长情况、增殖效率、保存情况以及应用范围。

此外，在培养完成后，增殖的成纤维细胞通常会黏附于培养皿或培养瓶的表面，如此易导致增殖的成纤维细胞成活率低，并且培养皿或培养瓶的表面面积有限，会限制成纤维细胞的增殖数量。

在现有技术中，有时候，人们会使用一些人工的组织工程架，这些结构整体体积比较大，需要用大烧杯或培养瓶之类的容器，无法使用培养皿等体积小的培养器，造成了实验室操作中的极大不便；而且这些结构对于细胞的成活率等没有任何的改善作用，甚至在很多操作中还会降低细胞的成活率，且还大大增加了操作的繁杂程度。因此，使用中存在很多的限制和不足。

因此，如何在提高成纤维细胞的增殖数量的同时，提高成纤维细胞的成活率、保证成纤维细胞的培养效果成为了亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本申请实施例提供了一种药物组合物及其应用，以解决现有技术中存在的技术缺陷。

本申请提供一种细胞培养基，包括：培养液、角蛋白颗粒和血清，其中，所述血清为牛血清或自体血清。

进一步地，所述血清的浓度为2％-5％，所述角蛋白颗粒在所述细胞培养基中的浓度为0.1-1％，所述角蛋白颗粒的粒径为20-40μm。

进一步地，所述细胞培养基，还包括壳聚糖，所述壳聚糖在所述细胞培养基中的浓度为0-1％。

进一步地，所述细胞培养基，还包括胶原蛋白，所述胶原蛋白在所述细胞培养基中的浓度为0-1％。

进一步地，所述培养液为DMEM培养液，该DMEM培养液包括以下质量份数的组分：DMEM干粉90-110份、碳酸氢钠30-50份、青霉素1-5份、链霉素1-5份、HEPES30-50份和L-谷氨酰胺1-5份。

进一步地，所述细胞培养基的酸碱度为5.0-7.2。

进一步地，所述细胞培养基为成纤维细胞的培养基。

本申请还提供一种细胞培养方法，包括：

取出皮肤组织块，对所述皮肤组织块进行冲洗处理后转移至培养皿中，加入消化液，过夜；

对所述皮肤组织块依次进行去皮、消化、离心处理，加入权利要求1-5任意一项所述的细胞培养基悬浮细胞，并将细胞接种在培养皿中，获得原代培养的成纤维细胞；

在所述成纤维细胞扩增达到预设数量的情况下，对所述成纤维细胞进行冲洗、消化、离心处理，加入上述的细胞培养基；