[发明专利]一种神经脱细胞预处理方法

权利要求书

1.一种神经脱细胞预处理方法，所述方法包括如下步骤：

（1）将神经在高渗溶液中处理12-24小时后，再在低渗溶液中处理12-24小时；

（2）将步骤（1）处理的神经置入硅胶模具中，垂直放在提前预冷的钢板上，再整体移入冷冻箱中冷冻1-1.5小时，再将放有神经的硅胶模具放入冷冻干燥装置中，冻干12-24小时，得到具有微通道的神经；

（3）将步骤（2）得到的神经沿着神经长轴纵向插入钢针，移去钢针，得到内部形成大通道的神经。

2.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述步骤（1）中的神经来自异种神经或同种异体神经，其中，异种神经包括来自猴、猪、牛、羊、马、狗、鼠的神经，同种异体神经包括来自人或人的尸体的神经。

3.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述高渗溶液选自质量浓度为5-10%的氯化钠溶液、10-20%葡萄糖溶液、10-20%的甘露醇溶液中的一种或两种以上的组合；所述低渗溶液为蒸馏水、质量浓度＜0.9%的氯化钠溶液、质量浓度＜5%的葡萄糖溶液中的一种或两种以上的组合。

4.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述步骤（2）中钢板预冷温度为-80℃，冷冻箱温度为负40℃-负20℃之间。

5. 根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述步骤（3）中插入钢针的数量依据神经直径决定，钢针的长度贯穿神经全长，插入5-8根，钢针直径为100-200 μm。

6.根据权利要求1-5任一所述的预处理方法，其特征在于，所述神经脱细胞预处理方法具体包括：

（1）将神经在浓度为6-8%的氯化钠溶液中震荡处理12小时，再将神经放入蒸馏水中震荡处理12小时，震荡速率为120-150 rpm；

（2）将步骤（1）处理的神经置入硅胶模具中，垂直放在预冷至-80℃的钢板上，再整体移入-40℃冷冻箱中冷冻1小时，再将放有神经的硅胶模具放入冷冻干燥装置中，冻干24小时，得到具有微通道的神经；

（3）移除硅胶模具，沿着神经长轴纵向插入5-8根钢针，移去钢针，得到内部形成大通道的神经。

7.一种神经脱细胞方法，所述方法包括如下步骤：

（1）按照权利要求1-6任一所述的方法对神经进行预处理；

（2）将预处理后的神经重新水化；

（3）将步骤（2）得到的神经置入体积浓度为1-2%的Triton X-100溶液中处理12-24小时，用蒸馏水洗涤3-5次，再转移到质量浓度为5-6%的CHAPS溶液中处理12-24小时，用蒸馏水洗涤3-5次，实现脱细胞。

8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）具体脱细胞方法如下：用体积浓度为2％的Triton X-100溶液震荡处理神经24小时，用蒸馏水洗涤3次，每次15分钟，再转移到质量浓度为6％的CHAPS溶液中震荡处理24小时，用蒸馏水洗涤3次，每次15分钟，获得脱细胞神经，置入含1%双抗的PBS 溶液中4℃保存备用。

9.一种脱细胞神经，所述神经通过权利要求7-8任一所述的神经脱细胞方法制备得到。

10.一种权利要求9所述的脱细胞神经在神经移植中的应用。