[发明专利]一种利用转分化技术诱导体细胞重编程至神经细胞模型的方法

权利要求书

1.一种诱导体细胞重编程至神经细胞模型的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1.以健康人类全血mRNA反转录的cDNA为模板，扩增ASCL1和MYT1 L全长基因，将PCR产物用8％的琼脂糖凝胶电泳，把大小合适的条带切下来进行胶回收，并把胶回收的目的条带和载体质粒pLVX进行双酶切后纯化，按目的片段和载体片段3:1的浓度比进行混合和连接反应，将连接好的质粒通过DH5α感受态细胞进行转化，涂于有氨苄抗性的LB固体平板，进行筛选；

步骤2.包装慢病毒：①转染293T细胞：取步骤1获得的重组质粒20μg，病毒包装质粒pMD2.G和pSPAX2分别10μg，加入超纯水中，总体积为450μl，再加入50μl的2.5mol/L的CaCl₂混匀，然后将其与500μl的2X BES逐滴混合，室温放置15-30min，均匀加入HEK293T细胞中，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，8-16个小时后，用PBS洗涤两次，换上新鲜培养液；②慢病毒收集：换液后48小时收集病毒，将含有慢病毒的培养液离心，去除细胞碎片，将上清离心，将病毒液浓缩为600μl；

步骤3.收集病毒前24小时，将精神分裂症患者的皮肤成纤维细胞传至细胞培养瓶，待细胞汇合度为40％-70％时即可侵染，细胞侵染前换上新鲜培养液，各取600μl浓缩好的ASCL1、MYT1 L两种慢病毒混合加入到待侵染的细胞中，30-36小时后，换上神经细胞诱导培养液，以后每2天换液，直至成纤维细胞分化为神经细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3所述的神经细胞诱导培养液配制方法如下：DMEM/F12培养基中加入1X的N2和B27，20ng/ml的βFGF，20ng/ml的EGF。

3.一种建立神经细胞疾病模型的方法，其特征在于，所述神经细胞由权利要求1所述的方法制备获得。