[发明专利]一种乳腺癌类器官的培养方法以及和肿瘤相关成纤维细胞的共培养方法

权利要求书

1.一种乳腺癌类器官和肿瘤相关成纤维细胞共培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A)取乳腺癌组织块，剪碎，加入消化液消化，向消化好的组织混合液加入洗涤液，洗涤后过滤得到细胞悬液，离心收集细胞，再加入洗涤液洗涤和离心收集细胞；加入基质胶BME和PDO完全培养基后培养至混合液凝固，再加入PDO完全培养基，继续培养，至有3D球状体形成；

B)CAFs细胞的获取；

C)将消化重悬洗涤过的乳腺癌类器官细胞与消化离心过的CAFs用基质胶和PDO完全培养基1:1混合重悬，铺板，37℃孵育10-15分钟，基质胶混合物凝固之后加入PDO完全培养基+10ng/mL的bFGF，继续培养，培养基每两天换一次。

2.根据权利要求1所述的乳腺癌类器官和肿瘤相关成纤维细胞共培养的方法，其特征在于，所述的乳腺癌类器官细胞系建立或传代的培养基的配方为：

3.根据权利要求1所述的乳腺癌类器官和肿瘤相关成纤维细胞共培养的方法，其特征在于，所述的乳腺癌类器官细胞系建立或传代的消化液的配方为：

4.根据权利要求1所述的乳腺癌类器官和肿瘤相关成纤维细胞共培养的方法，其特征在于，所述的乳腺癌类器官细胞系建立或传代的洗涤液的配方为：

5.根据权利要求1所述的乳腺癌类器官和肿瘤相关成纤维细胞共培养的方法，其特征在于，步骤A)的具体操作是：取手术切除的乳腺癌组织块，剪到碎块直径小于1mm；加入消化液混合，放置于37℃摇床消化，转速50rpm；消化20min后取出用力震荡，将组织散开，再放回37℃摇床继续消化20min，总计消化时间40min；将消化好的组织混合液加入一倍消化液体积的洗涤液，用力震荡，将细胞从组织中脱落，用70μm直径的细胞过滤网过滤细胞悬液，弃去未消化完全的胶原残余；将过滤好的细胞悬液离心，4℃，400g，5min；用洗涤液重悬，离心，4℃，400g，5min，重复两次，离心收集细胞沉淀。