[发明专利]一种电转染缓冲液及其应用在审
申请号: | 202010797365.7 | 申请日: | 2020-08-10 |
公开(公告)号: | CN111808880A | 公开(公告)日: | 2020-10-23 |
发明(设计)人: | 蔡明芳 | 申请(专利权)人: | 广州来恩生物医药有限公司 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 510000 广东省广州市中新广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 转染 缓冲液 及其 应用 | ||
1.一种电转染缓冲液,其特征在于所述电转染缓冲液包括Opti-MEM培养基。
2.一种如权利要求1所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,所述电转染缓冲液应用于细胞电转染过程。
3.如权利要求2所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,将所述电转染缓冲液重悬待电转染的细胞,然后加入外源基因载体,经混合得到电转染体系。
4.如权利要求3所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,所述外源基因载体为mRNA。
5.如权利要求3所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,所述电转染体系中,外源基因载体的浓度为1-5pg/cell每一待电转染的细胞;所述待电转染细胞的浓度为50-100nM。
6.如权利要求3所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,所述细胞电转染过程为:将电转染体系加入电转杯的中间凹槽中,将电转杯放到电转仪电极的凹槽中,启动电转仪电转染细胞。
7.如权利要求6所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,使用HARVAR D APPARATUS品牌BTX Agile Pulse MAX电转仪电转细胞,电转仪的电转参数为电压1200V,电脉冲长度0.1ms,间隔0.2ms,电脉冲1次。
8.如权利要求6所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,电转染完成后,取出电转杯中的细胞悬液,加入表达培养基中,然后放入CO2培养箱中培养20±4H。
9.如权利要求8所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,CO2培养箱中的培养条件为温度37±1℃,CO2浓度5±0.5%。
10.如权利要求8所述的电转染缓冲液的应用,其特征在于,所述表达培养基为含5-10vt%Knockout SR血清替代物和50-200IU/mL重组白介素rIL-2的A IM-V CTS无血清细胞培养基。
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