[发明专利]一种电转染缓冲液及其应用

说明书

本发明公开了一种电转染缓冲液及其应用，电转染缓冲液包括Opti‑MEM培养基；电转染缓冲液的应用为将电转染缓冲液重悬待电转染的细胞，然后加入外源基因载体，经混合得到电转染体系；电转染缓冲液成分明确，不含动物源或同种异体来源成分，提高细胞进行电转染的安全性和合规性；电转染缓冲液应用于细胞电转染过程中，实现细胞电转染，提高电转染过程的稳定性和成功率。

技术领域

本发明涉及一种电转染缓冲液及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

电转染是分子生物学中最常用的技术之一，通过提供瞬时局部电压，形成对细胞膜的电穿孔和对带电分子转运时的电泳作用，透细胞质膜，可以将药物、基因物质转移到体外培养的细胞内，实现对药物的直接细胞转运和细胞功能的编辑。进而实现在临床的应用。电转染过程需要提供适宜的电转染缓冲体系，维持电转染过程细胞所处环境的离子浓度，渗透压和pH等细胞敏感的条件。但是目前市售电转液主要成份为无机盐类成份，由于保密原因，成分不够明确，没有完全公开，在后续临床应用过程，是否含有对人体或细胞有害的成分，无法科学判断，对细胞治疗的安全性隐患巨大。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种电转染缓冲液，该电转染缓冲液成分明确，不含动物源或同种异体来源成分，提高细胞进行电转染的安全性和合规性。

本发明的第二个目的在于提供一种上述电转染缓冲液的应用，为将电转染缓冲液应用于细胞电转染过程中，实现细胞电转染，提高电转染过程的稳定性和成功率。

实现本发明的第一个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种电转染缓冲液，电转染缓冲液包括Opti-MEM培养基。

实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种如上所述的电转染缓冲液的应用，电转染缓冲液应用于细胞电转染过程。

进一步地，将电转染缓冲液重悬待电转染的细胞，然后加入外源基因载体，经混合得到电转染体系。

进一步地，外源基因载体为mRNA。

进一步地，电转染体系中，外源基因载体的浓度为1-5pg/cell每一待电转染的细胞；待电转染细胞的浓度为50-100nM。

进一步地，细胞电转染过程为：将电转染体系加入电转杯的中间凹槽中，将电转杯放到电转仪电极的凹槽中，启动电转仪电转染细胞。

进一步地，使用HARVARD APPARATUS品牌BTX Agile Pulse MAX电转仪电转细胞，电转仪的电转参数为电压1200V，电脉冲长度0.1ms，间隔0.2ms，电脉冲1次。

进一步地，电转染完成后，取出电转杯中的细胞悬液，加入表达培养基中，然后放入CO₂培养箱中培养20±4H。

进一步地，CO₂培养箱中的培养条件为温度37±1℃，CO₂浓度5±0.5％。

进一步地，表达培养基为含5-10vt％Knockout SR血清替代物和50-200IU/mL重组白介素rIL-2的AIM-V CTS无血清细胞培养基。

本发明的配方设计原理如下：

行业中，Opti-MEM培养基虽为现有，但常规使用于细胞培养中，而本发明明申请研究认为，Opti-MEM培养基可以作为电转染缓冲液应用于细胞电转染过程中，由于该电转染缓冲液的成分是明确的，不含动物源或同种异体来源成分，因此转染后的细胞生长稳定，对于细胞后续应用的研究，具有更好的可控性，规避了细胞进行电转染操作时引入成分不够清晰的电转染缓冲液带来的安全性和合规性风险

相比现有技术，本发明的有益效果在于：