[发明专利]表达NTNG1基因的细胞株的构建方法和应用

权利要求书

1.一种肝细胞癌的分子标记物，所述分子标志物为NTNG1基因或NTNG1基因的表达产物。

2.一种稳定过表达NTNG1基因的细胞株，其特征在于，所述细胞株是以肝癌细胞为目标系统，通过序列如SEDID NO：4所示的NTNG1过表达慢病毒感染，获得稳定过表达NTNG1基因的肝癌细胞。

3.一种稳定过表达NTNG1基因细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)分别用限制性内切酶EcoR I和BamH I酶切序列如SED ID NO：1所示的慢病毒载体，电泳获得序列如SED ID NO：2所示的线性化的载体；

(b)从新鲜组织标本中提取组织总RNA，经反转录成cDNA，PCR扩增获得序列如SED IDNO：3所示的NTNG1基因片段；

(c)将线性化的载体与NTNG1基因片段用DNA连接酶连接获得NTNG1过表达慢病毒载体；

(d)利用NTNG1过表达慢病毒载体包装制备序列如SED ID NO：4所示的NTNG1过表达慢病毒；NTNG1过表达慢病毒感染肝癌细胞株，利用抗生素进行药物筛选，获得稳定过表达NTNG1基因的细胞株。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述慢病毒载体为Plvx-CMV-MCS-T2A-Blasticidin；所述抗生素为灭稻瘟菌素。

5.一种稳定敲低NTNG1基因的细胞株，其特征在于，所述细胞株是以肝癌细胞为目标系统，通过序列如SED ID NO：7所示的NTNG1干扰慢病毒感染，获得稳定敲低NTNG1基因的肝癌细胞。

6.一种稳定敲低NTNG1基因细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将核苷酸序列如SED ID NO：5所示的shRNA模板连接至序列如SED ID NO：6所示的慢病毒载体，获得NTNG1干扰慢病毒载体；

(2)利用NTNG1干扰慢病毒载体包装制备序列如SED ID NO：7所示的NTNG1干扰慢病毒；NTNG1干扰慢病毒感染肝癌细胞株，培养转染后细胞，用抗生素进行筛选，获得稳定敲低NTNG1基因的细胞株。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述慢病毒载体为Plvx-hU6-MCS-ZsGreen 1-Puro；所述抗生素为嘌呤霉素。

8.一种权利要求2所述稳定过表达NTNG1基因的细胞株或权利要求5所述稳定敲低NTNG1基因的细胞株中的至少一种在生物体细胞内、外的NTNG1基因含量评估中的应用。