[发明专利]表达NTNG1基因的细胞株的构建方法和应用

说明书

本发明属于细胞生物技术领域，具体公开了一种表达NTNG1基因的细胞株的构建方法和应用。以肝癌细胞为目标系统，通过NTNG1过表达慢病毒感染，获得稳定过表达NTNG1基因的肝癌细胞。以肝癌细胞为目标系统，通过NTNG1干扰慢病毒感染，获得稳定敲低NTNG1基因的肝癌细胞。通过对本发明构建的细胞株的运用，研究NTNG1对肝癌增殖、生长、凋亡、侵袭、迁移和小鼠成瘤的影响，为肝癌发生与发展的分子机制和预后判断提供实验基础，为临床应用提供依据。

技术领域

本发明涉及细胞生物技术领域，具体涉及表达NTNG1基因的细胞株的构建方法和应用。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称肝癌)是全球第六大最普遍的癌症，也是第三大最常见相关死亡原因的癌症。根据2018年的癌症统计数据，全世界每年有841,000新的HCC病例，约55％的HCC患者来自中国。近年来，肝癌也是我国癌症死亡的主要原因之一，其死亡率更高居第2位。由于缺乏有效的临床诊断靶标，且肝癌恶性程度极高，侵袭性强，进展迅速，大部分患者就诊时已达中晚期，即使接受规范的系统治疗，中位OS往往不超过14个月，导致肝癌仍是死亡率最高的消化系统恶性肿瘤。因此，寻找一些准确的生物标志物在肝癌的诊断或预后中具有重要的临床意义。

NTNG1位于1号染色体1p13.3区，编码539个氨基酸，由10个外显子组成，长度大约60.5kDa，属于层粘连蛋白相关蛋白Netrin家族的一员。Netrin最早于1990年在秀丽隐杆线虫中发现，Netrins作为一类自分泌蛋白或者膜结合蛋白，可以通过结合不类型受体发挥不同的作用。最初它们在中枢神经系统的发展中起着重要作用，包括调节神经细胞的迁移、分化和凋亡，并稳定血脑屏障，限制免疫细胞进入中枢神经系统。除此之外，Netrins也参与一些非神经组织的黏附、迁移和分化等生理过程，如血管生成、淋巴管形成和炎症等。然而，NTNG1在肝癌组织中的表达情况未见报道。

目前仅有文献(Fujita Y，Nakanishi T，Ueno M，Itohara S，YamashitaT.Netrin-G1 Regulates Microglial Accumulation along Axons and Supports theSurvival of Layer V Neurons in the Postnatal Mouse Brain.Cell Rep.2020；31(4)：107580.doi：10.1016/j.celrep.2020.107580)针对NTNG1调节小鼠大脑神经系统功能的体内实验研究，表明在稳定敲低NTNG1后可导致小鼠大脑中小神经胶质细胞的聚集，并且导致皮质神经元的丢失。揭示了NTNG1参与调节大脑投射轴突神经元和小胶质细胞之间的双向神经营养的相互作用。

但目前关于稳定过表达NTNG1基因的细胞株、稳定敲低NTNG1细胞株在人原发性肝癌中的应用未见报道。

发明内容

本发明目的在于提供能够表达NTNG1基因的细胞株，以及此类细胞株的构建方法。通过该细胞株的构建和运用，研究NTNG1对肝癌增殖、生长、凋亡、侵袭、迁移和小鼠成瘤的影响，为肝癌发生与发展的分子机制和预后判断提供实验基础，为临床应用提供依据。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明提供一种肝细胞癌的分子标记物，所述分子标志物为NTNG1基因或NTNG1基因的表达产物。

进一步地，所述肝细胞癌为人原发性肝癌。

一方面，本发明提供一种NTNG1基因或NTNG1基因的表达产物中的至少一种在制备肝细胞癌药物中的用途。

一方面，本发明提供一种稳定过表达NTNG1基因的细胞株或稳定敲低NTNG1基因的细胞株中的至少一种在生物体细胞内、外的NTNG1基因含量评估中的应用。