[发明专利]一种去甲哈尔满在制备群体感应抑制剂中的应用及菌株

权利要求书

1.一种海洋细菌(Microbacterium oleivorans)40DY182，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期2018年7月13日，保藏编号GDMCC No：60414，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，邮编510075。

2.一种权利要求1所述海洋细菌40DY182在制备去甲哈尔满中的应用，其特征在于式(Ⅰ)所示去甲哈尔满按如下方法制备：

(1)将海洋细菌(Microbacterium oleivorans)GDMCC No：60414经发酵培养获得的发酵液过滤除去菌体，滤液加入等体积的乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩至干，得到粗提物；

(2)将步骤(1)粗提物利用高效液相制备色谱分离，选择甲醇-水作为洗脱溶剂，0～30min从10％到100％线性梯度增加甲醇，分别收集0-6min、6-12min、12-16min、16-20min、20-25min、25-30min流出液，得到6个馏分，分别标记为流出液A、流出液B、流出液C、流出液D、流出液E、流出液F；

(3)取步骤(2)流出液E利用高效液相制备色谱分离，选择甲醇-水作为洗脱溶剂，0～30min从30％到100％线性梯度增加甲醇，分别收集0-7min、7-14min、14-18min、18-25min、25-30min流出液，得到5个馏分，分别标记为流出液A1、流出液B1、流出液C1、流出液D1、流出液E1；

(4)取步骤(3)流出液A1利用高效液相制备色谱进一步纯化，选择甲醇-水作为洗脱溶剂，0～135min从20％到100％线性梯度增加甲醇浓度，收集22min出现的峰，并浓缩至干，得到式(Ⅰ)所示化合物；

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(2)高效液相制备色谱柱：PhenomenexUSA,Luna 10μm C18，250*21.2mm；流动相：甲醇-水；流速：5mL/min；检测波长：210nm；进样量1mL，粗提取物的浓度100mg/mL。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于步骤(3)高效液相制备色谱柱：AgilentEclipse XDB-C18 5μm 250*9.4mm；流动相：甲醇-水；流速：2mL/min；检测波长：210nm；进样量20μL，组分E的浓度20mg/mL。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于步骤(4)高效液相制备色谱柱：AgilentEclipse XDB-C18 5μm 250*9.4mm；流动相：甲醇-水；流速：2mL/min；检测波长：210nm；进样量20μL，组分A1浓度20mg/mL。

6.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述发酵液的制备方法为：将海洋细菌GDMCCNo：60414接种至斜面YP海水固体培养基，在30℃恒温培养箱中培养过夜，获得斜面菌体；YP海水固体培养基：酵母提取物1g/L，蛋白胨5g/L，海盐22.5g/L，琼脂15g/L，溶剂为去离子水，121℃，灭菌20min；

再将斜面菌体接种至YP海水液体培养基，在30℃恒温摇床中，180rpm振荡培养过夜，获得种子液；YP海水培养基：酵母提取物1g/L，蛋白胨5g/L，海盐22.5g/L，溶剂为去离子水，121℃，灭菌20min；

将种子液以体积浓度2.5％的接种量接种至YP海水液体培养基中，30℃、压力0.1MPa培养，获得发酵液。