[发明专利]一种去甲哈尔满在制备群体感应抑制剂中的应用及菌株

说明书

本发明公开了一种去甲哈尔满在制备群体感应抑制剂中的应用及菌株，本发明海洋细菌40DY182次级代谢产物中有去甲哈尔满，能较好的抑制紫色杆菌紫色素的产生以及生物被膜的形成；耐药性铜绿假单胞菌绿脓菌素产生减少，生物被膜形成受到抑制，在浓度增大时，与对细菌群体感应系统活性的抑制效果增强。

(一)技术领域

本发明涉及一种9H-吡啶[3,4-b]吲哚的应用，特别涉及一种9H-吡啶[3,4-b]吲哚在群体感应系统中的应用，所述9H-吡啶[3,4-b]吲哚由海洋来源的海洋细菌(Microbacterium oleivorans)40DY182经发酵培养分离纯化获得。

(二)背景技术

临床上出现多重耐药菌株使得新型抗生素研究越来越困难，研发难度增大、周期变长、作用效率低下和细菌产生耐药性的时间越来越短等问题，使得细菌耐药性成为越来越严重的世界性难题。为了克服这些问题，寻找可替代的新型抗菌物质、解决细菌耐药性问题已在研究界受到广泛关注。目前抗菌的一种新策略是群体感应抑制策略。细菌在生长繁殖过程中，会根据环境的变化分泌一些特定的信号分子到周围环境中去，根据这些信号分子的变化来检测所处环境中自身或者其他微生物种群的变化情况，科学家们称这种信号分子为自诱导物(auto inducer,AI)。细菌不断地向外界分泌信号分子，在一定的时期达到一个阈值，细菌就会调整各自体内相关系统来应对这种生存环境的改变，这一调控系统被称为细菌群体感应系统。目前的研究表明，多数细菌毒力的形成、发展及功能调节需要群体感应系统调控。因此通过抑制细菌群体感应，能够降低细菌毒力的产生，且由于缺少竞争性生存压力，细菌不易诱导耐药性突变。这种群体感应抑制剂可以单独使用，也可以作为抗生素的辅助治疗剂达到防治细菌感染的目的。

本发明首次从海洋细菌(Microbacterium oleivorans)40DY182中获得化合物norharmane，并且首次研究该化合物的群体感应抑制活性，目前未见该化合物具有抑制紫色杆菌和铜绿假单胞菌群体感应活性的报道。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种9H-吡啶[3,4-b]吲哚在制备群体感应抑制剂中的应用，9H-吡啶[3,4-b]吲哚由海洋细菌(Microbacterium oleivorans)40DY182发酵分离纯化得到，具有抑制紫色杆菌和耐药性铜绿假单胞菌群体感应系统活性，该类化合物在不抑制致病菌菌体生长的范围内能够显著的降低相关致病因子的表达，降低细菌的毒力，可用于防治具有群体感应系统的细菌感染。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种式(Ⅰ)所示去甲哈尔满(norharmane)在制备群体感应抑制剂中的应用，所述去甲哈尔满亦为9H-吡啶[3,4-b]吲哚(9H-Pyrido[3,4-b]indole)。

进一步，所述去甲哈尔满为紫色杆菌或铜绿假单胞菌的群体感应抑制剂，所述紫色杆菌为紫色杆菌(C.violaceum)ATCC 12472，所述铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)C218，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期2020年5月13日，保藏编号GDMCC No：61027，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，邮编510075。

所述去甲哈尔满为紫色杆菌紫色素产生抑制剂、紫色杆菌生物被膜形成抑制剂、铜绿假单胞菌绿脓菌素产生抑制剂或铜绿假单胞菌生物被膜形成抑制剂。

本发明还提供一种式(Ⅰ)所示norharmane的制备方法，所述方法按如下步骤进行：

(1)将海洋细菌(Microbacterium oleivorans)40DY182经发酵培养获得的发酵液过滤除去菌体，滤液加入等体积的乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩至干，得到粗提物；