[发明专利]一种复合溶剂加水刺激法提取微藻胞内代谢组产物的方法

权利要求书

1.一种复合溶剂加水刺激法提取微藻胞内代谢组产物的方法，包括以下步骤：

1）将微藻菌体按其体积的5~10倍加入氯仿、甲醇溶液（氯仿、甲醇体积比范围为1:4~4:1）混合均匀；

2）将混合物在冰水中超声处理10~60 min，利用溶剂初步破坏藻细胞膜并进行代谢物提取；

3）将混合物在4℃、10000 g下离心20 min，收集藻细胞进一步破碎及提取；

4）将离心后所得的氯仿、甲醇相收集作为第一次提取物；

5）向沉淀物细胞中加入其体积1~3倍的去离子水，在冰浴中震荡30~120s，进一步扰乱细胞膜磷脂双分子层的排列，促进细胞膜的解体；

6）在4℃、10000g下离心5min，上清液收集加入第一次提取物中；

7）再将剩余的细胞颗粒重复第一步提取操作，然后将氯仿甲醇相作为第二次提取物，两次提取物进行合并；

8）在提取物中加入氯化钠溶液离心分层，上层甲醇相用于检测磷酸糖、有机酸、能量、还原力，下层氯仿相用于检测色素、脂质、脂肪酸等。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中微藻菌体可以为湿藻泥或干菌体。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5）加入去离子水后震荡方法可以为涡旋或超声，要求在冰浴上进行。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤8）中将氯仿甲醇提取物用1~3%氯化钠溶液分层。

5.根据权利要求1或3所述的方法，其中，所述的微藻包括小球藻、三角褐指藻、微拟球藻、裂殖壶菌、破囊壶菌、螺旋藻、金藻或雨生红球藻。