[发明专利]一种牙髓干细胞的培养及其应用

权利要求书

1.一种牙髓干细胞的培养方法，其特征在于，

培养过程中使用了鬼针草苷I，所述鬼针草苷I结构如下：

2.权利要求1所述的牙髓干细胞的培养方法，其特征在于,培养步骤如下：

(1)获得原代牙髓干细胞并进行传代培养；

(2)配制鬼针草苷I成骨诱导条件培养基：

含10％AB血清的α-MEM培养液，加入β-甘油磷酸钠、抗坏血酸、地塞米松、鬼针草苷I至终浓度分别为10mmol/L、0.05mmol/L、100mmol/L以及0.1-0.2mmol/L；

(3)诱导培养：

第3代DPSCs消化后制备细胞悬液，将细胞接种于步骤(2)获得的成骨诱导条件培养基进行诱导培养。

3.权利要求2所述的牙髓干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)为：

取牙髓组织，置于无血清培养基中，将牙髓组织剪成组织块；得到的组织块置于人牙髓干细胞培养基中进行培养，覆盖盖玻片；在培养第4～12d时，根据细胞生长密度，半量更换培养基；培养第15～18d时，细胞汇合率达到70～80％，进行传代培养，得到牙髓干细胞；

所述人牙髓干细胞培养基以α-MEM培养基为基础，包含体积百分含量为5％～10％的人AB血清、100μM抗坏血酸、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素钠和100mg/ml链霉素。

4.权利要求3所述的牙髓干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)鬼针草苷I终浓度为0.2mmol/L。

5.权利要求4所述的牙髓干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(3)诱导培养：

第3代DPSCs消化后制备细胞悬液，将细胞接种于成骨诱导条件培养基进行诱导培养：以2×10⁴个/孔的密度接种至24孔板，37℃、5％CO₂培养箱中培养，待细胞融合至80％左右时，将各组样本孔内的培养液换为鬼针草苷I成骨诱导条件培养基。