[发明专利]一种牙髓干细胞的培养及其应用

说明书

本发明公开了一种牙髓干细胞的培养方法：（1）获得原代牙髓干细胞并进行传代培养；（2）配制鬼针草苷I成骨诱导条件培养基：含10%AB血清的α‑MEM培养液，加入β‑甘油磷酸钠、抗坏血酸、地塞米松、鬼针草苷I终浓度分别为10 mmol/L、0.05 mmol/L、100 mmol/L以及0.1‑0.2 mmol/L；（3）诱导培养：第3代DPSCs消化后制备细胞悬液，将细胞接种于成骨诱导条件培养基进行诱导培养。

技术领域

本发明涉及一种牙髓干细胞的培养方法及其在骨组织工程，骨组织治疗上的应用，属于细胞培养技术领域。

背景技术

在 2000 年，Gronthos 等科学家首次从成人第三磨牙的牙髓组织中分离培养出一种细胞，它具有克隆性和高度增殖能力，移植到小鼠体内后能形成牙髓/牙本质样结构,具有多向分化能力，因此起名为牙髓干细胞（dental pulp stem cells，DPSCs）。与 BMSCs相比，DPSCs 不但取材简单，对机体侵入性小，而且变废为宝，使医疗垃圾获得医学研究价值。随后科学家陆续发现其他多种牙源性干细胞：其中 DPSCs 因取材丰富、容易培养等优点而受到研究者的青睐，相关研究较多，也是第一个用来治疗临床骨缺损的牙源性干细胞。体内外实验均证实 DPSCs 在骨组织工程中有巨大应用潜力，Mori 等发现DPSCs 体外分化为成骨细胞样细胞,表达大量标记物如碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、I 型胶原蛋白（collagen type 1，Col I)、骨桥蛋白（osteopontin，OPN)和骨钙蛋白（osteocalcin，OCN)。

在体外培养中，牙髓干细胞(Dental pulp stem cell，DPSC)具有多向分化的潜能，其不仅具有成脂、成骨、成软骨的特性，还能分化为多种细胞形态，如内皮细胞、肌源性细胞、肝脏细胞、黑色素细胞等。由于 DPSC 的上述特性，将其作为种子细胞时，不仅能应用于牙源性组织工程再生，还能更广泛的应用于全身多个系统脏器的组织工程再生。

在牙齿发生的过程中，细胞外基质内存在复杂的信号分子与通路参与对 DPSC 增殖与分化的调控。故可使用各种化合物处理 DPSC，从而上调有关信号分子的表达或直接激活相关通路，调控DPSC 的分化。

本发明旨在提供一种牙髓干细胞的培养方法，具体为刺激其成骨分化，在骨组织工程上具有很大的应用潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种牙髓干细胞的培养方法，具体为刺激牙髓干细胞的增殖以及促进其成骨分化，在骨组织工程上具有很大的应用潜力。

现有技术有人从小花鬼针草中 1 个新的橙酮苷类化合物（中草药 ChineseTraditional and Herbal Drugs,第 50 卷,第 22 期 ,2019 年11 月）。菊科鬼针草属植物小花鬼针草 Bidens parvifloraWilld. 为 1 年生草本植物，该植物以全草入药，其对感冒咳嗽、呼吸道感染、急性阑尾炎、风湿性关节炎、黄疸、疟疾、肠痈等疾病均有较好的治疗效果，在免疫调节、肝脏保护、降血压、调血脂、抗炎、抗菌、抗氧化等多方面均表现出较强的药理活性。所述分离的新的橙酮苷类化合物命名为鬼针草苷 I，其结构如下所示：

。

所述鬼针草苷 I具有显著的刺激牙髓干细胞增殖以及促进其成骨分化的作用，在骨组织工程上具有很大的应用潜力。

本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

一种牙髓干细胞的培养方法，其特征在于，培养步骤如下：

（1）获得原代牙髓干细胞并进行传代培养；

（2）配制鬼针草苷 I成骨诱导条件培养基：