[发明专利]中枢神经系统中毒的体外模型及评价重活化剂疗效的方法

权利要求书

1.一种建立中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型的方法，包括如下步骤：

(1)获得transwell体外血脑屏障模型；

(2)将浓度0.065～0.20mg/ml的乙酰胆碱酯酶溶液和体积百分比浓度为0.5×10^-8～10^-5的有机磷化合物溶液以(1～10):1体积比依次加入至所述transwell体外血脑屏障模型的下池中，静置1至10分钟，得到中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，有机磷化合物选自含碳-磷单键的有机磷化合物和含有机官能团的磷酸衍生物。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，有机磷化合物选自沙林和诺维乔克。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤(2)中，有机磷化合物为沙林，有机磷化合物溶液的体积百分比浓度为10^-7～10^-5。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(2)中，有机磷化合物溶液的体积百分比浓度为10^-6。

6.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤(2)中，有机磷化合物为诺维乔克，有机磷化合物溶液的体积百分比浓度为0.1×10^-8～10^-5。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，步骤(2)中，有机磷化合物溶液的体积百分比浓度为0.5×10^-8。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，乙酰胆碱酯酶溶液为1～2ml，有机磷化合物溶液为0.2～1ml。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，乙酰胆碱酯酶溶液和/或有机磷化合物溶液采用的溶剂为ECM-PRF基础液。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，步骤(1)中，通过如下的步骤获得transwell体外血脑屏障模型：

在位于培养板的板孔内的transwell小室的膜上接种内皮细胞，向上池和下池加入培养基，待培养至细胞长满膜表面，即得到所述transwell体外血脑屏障模型。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于如下a至g中的一项或多项：

a.所述内皮细胞为脑微血管内皮细胞；

b.transwell小室中膜的材料为聚乙烯膜和/或聚碳酯膜；

c.在接种前，将纤维粘连蛋白负载在transwell小室的膜表面；

d.细胞接种的密度为每个板孔1×10⁵～5×10⁵个细胞/ml；

e.培养过程中多次更换培养基；

f.培养时间为8～16天；

g.待培养至细胞长满膜表面且细胞融合，即得到所述transwell体外血脑屏障模型。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，第a项中，所述内皮细胞选自鼠脑微血管内皮细胞、猪脑微血管内皮细胞、牛脑微血管内皮细胞、人脑微血管内皮细胞和bEnd.3细胞。

13.根据权利要求11所述的方法，其中，第a项中，所述内皮细胞为鼠脑微血管内皮细胞。

14.根据权利要求11所述的方法，其中，第a项中，所述脑微血管内皮细胞为原代脑微血管内皮细胞。

15.根据权利要求11所述的方法，其中，第a项中，通过两次酶消化法提取得到脑微血管内皮细胞。