[发明专利]中枢神经系统中毒的体外模型及评价重活化剂疗效的方法

说明书

本发明属于医药领域，具体涉及一种建立中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型的方法，包括如下步骤：(1)获得transwell体外血脑屏障模型；(2)将浓度0.065～0.20mg/ml的乙酰胆碱酯酶溶液和体积百分比浓度为0.5×10^‑8～10^‑3的有机磷化合物溶液以(1～10):1体积比依次加入至transwell体外血脑屏障模型的下池中，静置1至10分钟，得到中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型。本发明还涉及体外评价乙酰胆碱酯酶重活化剂药效的方法。本发明体外模型有效模拟了中枢神经系统有机磷化合物中毒的情况，本发明评价方法能准确、快速评价乙酰胆碱酯酶重活化剂的疗效。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型，还涉及体外评价乙酰胆碱酯酶重活化剂疗效的方法。

背景技术

以往研究已经证明，中枢神经系统有机磷化合物中毒后会立即抑制神经中枢的乙酰胆碱酯酶，导致中枢的乙酰胆碱大量蓄积，最终引发中毒人员出现惊厥、脑损伤甚至死亡。救治有机磷化合物中毒的主要药物是重活化剂，它是一类能迅速恢复乙酰胆碱酯酶功能的药物。

目前，体外评价重活化剂药效的方法是：先将有机磷毒剂与乙酰胆碱酯酶结合构建体外中毒模型，然后直接加入重活化剂评价药效，但这种方法的评价结果与体内药效评价结果往往差异非常大。另外，体内评价重活化剂药效的方法虽然相对准确，但其研究成本颇高、效率低，无法做到大量、快速检测和筛选药物。

近年来的研究发现，药物进入神经中枢主要受血脑屏障的限制，血脑屏障是横跨循环系统与中枢系统的致密生物膜系统，其主要通过空间屏蔽、电荷屏蔽及脂溶性屏蔽等作用限制大分子、正电荷及水溶性药物进入神经中枢。目前，涉及血脑屏障的体外模型具有代表性的是transwell体外血脑屏障模型(如图1所示)，包括transwell小室1-1，其底部设置有通透性的膜1-2，transwell小室1-1位于培养板1-4的板孔中，transwell小室1-1内称为上池1-5，板孔孔壁与transwell小室1-1之间称为下池1-6，将细胞1-3接种于transwell小室1-1的膜1-2上，待细胞1-3生长致密且铺满膜1-2后，向上下池内装入培养介质，即建立好transwell体外血脑屏障模型；向模型的上池1-5中加入待测药物，规定时间后测试下池1-6的药物浓度，可以计算出药物对血脑屏障的通透率。本申请的申请人利用血脑屏障体外模型对重活化剂的药效进行评价时却发现，其评价结果仍不够准确。

因此，目前亟需一种能准确、快速地在体外评价乙酰胆碱酯酶重活化剂药效的方法。

发明内容

本发明方法采用transwell体外血脑屏障模型结合特定浓度的乙酰胆碱酯酶溶液及有机磷化合物溶液建立了有效模拟中枢系统有机磷化合物中毒(例如重度中毒)的体外模型。本发明方法还采用该体外模型及特定浓度的重活化剂评价重活化剂的疗效，评价准确度高，操作简单、快速。

为实现上述目的，本发明第一方面涉及一种建立中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型的方法，包括如下步骤：

(1)获得transwell体外血脑屏障模型；

(2)将浓度0.065～0.20mg/ml(例如0.07mg/ml、0.075mg/ml、0.08mg/ml、0.085mg/ml、0.09mg/ml、0.1mg/ml、0.15mg/ml、0.18mg/ml)的乙酰胆碱酯酶溶液和体积百分比浓度为0.5×10^-8～10^-3(优选为0.5×10^-8～10^-5、10^-6～10^-3)的有机磷化合物溶液以(1～10):1体积比(例如2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1体积比)依次加入至所述transwell体外血脑屏障模型的下池中，静置1至10分钟(例如2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟)，得到中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型。