[发明专利]一种快速检测AKK菌的荧光定量PCR引物组、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种快速检测AKK菌的荧光定量PCR引物组，及其在制备检测AKK菌的荧光定量PCR试剂或试剂盒方面的应用，引物组包括正向引物和反向引物，引物序列依次如SEQ ID NO：1‑2所示；该引物组是根据AKK菌的16SrRNA基因组序列设计的，特异性强，准确度高，稳定性好。发明还公开了一种快速检测AKK菌的荧光定量PCR试剂盒，及其在临床或科研检测AKK菌中的应用，包括上述特异性引物组，并优化了反应体系和反应条件，可以特异的从复杂样本中定量检出AKK菌，与其他细菌无交叉反应；准确度高，重复性好，灵敏度强，可用于快速、敏感、准确地定量检测肠道菌群中的AKK菌。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种快速检测AKK菌的荧光定量PCR引物组、试剂盒及其应用。

背景技术

肠道菌群是人类肠道中数量庞大的微生物群体，其组成和改变与宿主的健康状况密切相关，因此，观察肠道菌群的变化可为防治相关疾病提供一定的科学依据。目前，肠道菌群丰度的检测方法主要包括基因测序法和分子生物学方法两大类。基因测序法是微生物丰度研究的常用方法但存在耗时长、成本高、影响因素多等问题；而分子生物学技术方法具有检测时间短、灵敏度高、结果准确等优势，弥补了测序法的诸多不足，被广泛地应用于微生物检测的研究中。在分子生物学检测方法中，荧光定量PCR技术更因具有快速、可定量、灵敏度高、重复性好、能检出死、活细菌等特点，成为了肠道微生态研究中重要的分子生物学方法之一。虽然国内外已有不少关于定量PCR检测方法建立与应用的报道，但粪便中AKK菌的定量PCR检测方法的研究目前尚无。

AKK菌是人体肠道当中的原籍菌，但是由于其在肠道中的含量低，且不能在有氧环境下培养，直至2004年才被科学家鉴定出来。与双歧杆菌和乳酸杆菌相比，AKK菌绝对是个初出茅庐但实力超群的毛头小菌。在人体各种疾病的研究中发现，AKK菌是一种有益菌：肥胖人群体内的AKK菌水平显著低于健康人群，并且AKK菌的丰度还与胰岛素敏感性和更健康的代谢状态之间具有正相关性；肠道里AKK菌含量高的癌症患者其免疫疗法的治疗效果更好。比利时鲁汶大学Cani团队通过采用严谨的随机、双盲、安慰剂对照人体试验发现，口服AKK菌能够降低体重，提高胰岛素敏感性，降低胰岛素血症等益处。

因此，本领域迫切需要开发一种快速、特异、可定量的AKK菌检测手段，为AKK菌的筛查及与肠道菌群有关的研究提供技术支持。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种快速检测AKK菌的荧光定量PCR引物组，根据AKK菌的16SrRNA基因组序列设计，特异性强，扩增AKK菌的准确度高，稳定性好；

本发明的目的之二在于提供一种上述引物组在制备检测AKK菌的荧光定量PCR试剂或试剂盒方面的应用。

本发明的目的之三在于提供一种快速检测AKK菌的荧光定量PCR试剂盒，包括上述特异性引物组，并优化了反应体系，可以特异的从样本中检出AKK菌，与AKK菌以外的其他细菌无交叉反应；准确度高，重复性好，灵敏度强，可用于快速、敏感、准确地定量检测肠道菌群中的AKK菌。

本发明的目的之四在于提供一种上述试剂盒在临床或科研检测AKK菌中的应用，进一步优化了PCR扩增条件，荧光信号的强弱与模板扩增产物的对数线性关系好，定量检测准确度高；且操作简单，自动化程度高，交叉污染少，结果判读明确、直观。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种快速检测AKK菌的荧光定量PCR引物组，包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

快速检测AKK菌的荧光定量PCR引物组在制备检测AKK菌的荧光定量PCR试剂或试剂盒方面的应用。