[发明专利]一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法在审
申请号: | 202010802196.1 | 申请日: | 2020-08-11 |
公开(公告)号: | CN114075532A | 公开(公告)日: | 2022-02-22 |
发明(设计)人: | 华子昂;朱美瑛;刘宝全;万君兴;竹添;张建;赵凯龙 | 申请(专利权)人: | 华子昂 |
主分类号: | C12N5/00 | 分类号: | C12N5/00;C12N5/0775;C12N5/0789 |
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地址: | 102300 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 干细胞 培养 毛细管 明胶 氨基 多糖 共聚 载体 及其 制备 方法 | ||
1.一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,具体步骤如下:
S1 将明胶、氨基聚糖与三偏磷酸钠按比例制备混合胶液,再将纳米碳酸钙充分分散在胶液中;
S2 将胶液拉制成薄壁毛细管,利用碳酸钠溶液激活三偏磷酸钠进行交联与固定;
S3将胶液制成厚壁管并将多根毛细管包裹形成毛细管束,利用碳酸钠溶液激活三偏磷酸钠进行交联与固定;
S4 将完成交联固定后的毛细管束冷冻并切割制成小段;
S5将小段的毛细管束置于稀酸溶液中,利用稀酸使碳酸钙溶解并形成毛细管束中管壁的微孔管道;
S6 将小段的毛细管束充分洗净,低温干燥脱水,无菌处理后检测与保存,得到毛细管型干细胞3D培养用明胶与氨基多糖共聚载体。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,利用三偏磷酸钠在碱性条件下进行多羟基物质的交联,交联后的载体可以用胶原蛋白酶和磷酸酯酶温和水解。
3.根据权利要求1所述的一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,使用纳米碳酸钙做致孔剂,明胶与纳米碳酸钙的质量混合比例范围1:0.2-2。
4.根据权利要求1所述的一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,S2中纳米碳酸钙有效增强毛细管的机械强度,拉制的毛细管直径为0.1-2mm。
5.根据权利要求1所述的一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,S2中胶液中可以使用更多的含羟基的人体干细胞巢内组份,如:明胶、氨基多糖等,更有利于提升干细胞3D培养载体的性能。
6.根据权利要求1所述的一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,S3利用厚壁胶管将多根毛细管包裹形成毛细管束,可以同步完成,也可以分批完成。
7.根据权利要求1所述的一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体是小段的毛细管束,由长的毛细管束经过冷冻切割、稀酸溶解纳米碳酸钙形成微孔管道、清洗、低温干燥、辐照灭菌等后处理过程制备。
8.根据权利要求1所述的一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体是大量的磷酸酯键交联形成,可以通过胶原蛋白酶和磷酸酯酶温和裂解共聚载体释放其中培养的干细胞。
9.根据权利要求1所述的一种干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体及其制备方法,其特征在于,多孔载体是仿真人体干细胞3D培养环境设计,不仅满足MSC类干细胞3D培养制备,也适用HSC类干细胞3D培养制备。
10.保护该方法制备的干细胞3D培养用毛细管型明胶与氨基多糖共聚载体在干细胞3D培养中的应用。
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