[发明专利]基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法在审
申请号: | 202010805565.2 | 申请日: | 2020-08-12 |
公开(公告)号: | CN111910003A | 公开(公告)日: | 2020-11-10 |
发明(设计)人: | 何培元;李炳庆;侯志平;尹春英;王鑫;李思锦 | 申请(专利权)人: | 承德医学院附属医院 |
主分类号: | C12Q1/6886 | 分类号: | C12Q1/6886 |
代理公司: | 苏州高专知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32474 | 代理人: | 冷泠 |
地址: | 067000 河北*** | 国省代码: | 河北;13 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 直肠 粘膜 上皮细胞 mirnas 肠癌 早期 诊断 方法 | ||
1.基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、直肠拭子采集;
S2、肿瘤部位拭子采集;
S3、细胞内总miRNA提取,进行反转录;
S4、利用realtime PCR方法检测;
S5、统计学分析。
2.根据权利要求1所述的基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于:所述S1中将直肠拭子棒,用75%酒精浸泡,生理盐水冲洗,鼓风干燥箱干燥,备用;使用时先用扩肛器将肛门口扩开,将刷头伸入,沿距肛门口5cm的直肠粘膜表面旋转2周,取出拭子棒,置于RNA提取液中,低温保存。
3.根据权利要求2所述的基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于:所述S1中浸泡时间为30min。
4.根据权利要求2所述的基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于:所述S1中保存温度为4℃。
5.根据权利要求2所述的基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于:所述S2大肠癌患者术中切除的肿瘤组织及癌旁组织用步骤S1中备用的拭子棒在癌组织及癌旁组织表面旋转2周,置于RNA提取液中,低温保存。
6.根据权利要求5所述的基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于:所述S2中保存温度为4℃。
7.根据权利要求1所述的基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于:所述S4设U6为内参基因,以cDNA产物浓度等比例稀释设立标准曲线,检测miRNAs在大肠癌组织、癌旁组织及直肠拭子刷检上皮细胞中的表达。
8.根据权利要求1所述的基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于:所述S5中利用统计软件,用多元方差分析比较多个miRNAs在不同个体间的差异,马氏距离法分析不同组单个miRNA表达量,以P0.05为有统计学差异。
9.根据权利要求1所述的基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法,其特征在于:所述S5中的统计软件为SPSS11.0。
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