[发明专利]基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法

说明书

本发明一种基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法，包括以下步骤：S1、直肠拭子采集；S2、肿瘤部位拭子采集；S3、细胞内总miRNA提取，进行反转录；S4、利用realtime PCR方法检测；S5、统计学分析。本发明无创，患者依从性好：肛门刷检时刷检获取直肠粘膜上皮细胞；标本处理流程简单，miRNA可用于降解检材，不易受食物药物等影响，并且检测结果可信度高；基因在大肠癌早期即可出现变化，因此适用于早期筛查；技术成熟，检测价格低廉，易于推广，用于于人群大规模筛查。

技术领域

本发明涉及生物医学研究和临床检测诊断技术领域，特别是涉及一种基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法。

背景技术

随着我国人们生活水平的提高，饮食习惯与结构的改变，加之人口老龄化趋势影响，大肠癌发病率和死亡率逐年升高。据统计，2015年我国死于大肠癌的患者高达40万。由于大肠癌早期症状不明显，多数患者往往在出现症状数周甚至数月后才到医院就诊，多已发展到晚期，错过了最佳治疗时机。

目前，在全球范围内，结肠镜检因不但能直视病灶还能钳取活检进行病理学检查，被誉为大肠癌诊断的“金”标准。但是由于结肠镜检是侵入性检查，被检查者有腹痛等不适症状，部分需筛查者拒绝接受此项检查，加之结肠镜设备及医师有限，不能全面推广用于人群筛查。大便潜血(又称便隐血)是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。一些欠发达国家常常用此检验方法作为大肠癌筛查的主要手段。此项检查虽然无创、廉价，但是结果受诸多因素影响：(1)食物，比如：肉、肝、血、萝卜等可能出现假阳性结果；(2)药物：含铁、铜、碘化钾等药物干扰实验结果；(3)标本处理：标本采集后需立即送检，具有一定时效性；(4)试剂：检测药物，3％过氧化氢易失效。检查敏感性差，容易出现假阴性及假阳性结果，严重限制了其临床应用。大肠癌检测方法还包括：结肠磁共振成像(MRC)、CT影像学检测方法，MRC在结肠增殖性病变诊断敏感度和特异度较高，同时结合CT影像诊断可有效进行大肠癌临床术前分期，但是影像学表现多为中晚期患者，而且检查价格贵，目前不能普及为CRC筛查的常规手段；与大肠癌发生相关肿瘤标志物检查，癌胚抗原(CEA)及常见的蛋白类复合物中的CA125、CA242、CA199，为临床最为常用的检测指标，但通常需要与粪便潜血实验及肠镜检查相结合进行大肠癌的诊断。

大肠癌组织中许多与癌相关的基因异常表达不仅局限于大肠癌灶中，癌灶外的其它大肠黏膜也可检出同类基因的异常表达。美国加利福尼亚州临床医疗肿瘤研究中心Nancy团队研究结果表明以健康个体大肠黏膜基因mRNA表达水平为对照(同类研究多以癌旁组织为研究对象)，大肠癌患者mRNA的异常表达并非仅限于癌组织，在癌灶以外看似正常的肠黏膜中同样存在与癌灶同种基因mRNA的异常表达。可惜的是mRNA易降解、不易保存的特性致使该方法不能在临床中实际广泛应用。如果能用一种性质稳定的生物学指标替代mRNA，这一无创检查就有可能应用于临床实践。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法。

本发明通过如下技术方案实现上述目的：一种基于直肠粘膜上皮细胞刷检的miRNAs大肠癌早期筛查和诊断方法，包括以下步骤：

S1、直肠拭子采集；

S2、肿瘤部位拭子采集；

S3、细胞内总miRNA提取，进行反转录；

S4、利用realtime PCR方法检测；

S5、统计学分析。

进一步的，所述S1中将直肠拭子棒，用75％酒精浸泡，生理盐水冲洗，鼓风干燥箱干燥，备用；使用时先用扩肛器将肛门口扩开，将刷头伸入，沿距肛门口5cm的直肠粘膜表面旋转2周，取出拭子棒，置于RNA提取液中，低温保存。