[发明专利]灌流培养CHO细胞制备抗CLDN18_2抗体的方法在审
| 申请号： | 202010805651.3 | 申请日： | 2020-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN114075587A | 公开（公告）日： | 2022-02-22 |
| 发明（设计）人： | 陈庆财;顾长龙;徐传学;孙振鹏;文勇;王玉伟 | 申请（专利权）人： | 江苏奥赛康药业有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C12N5/071 |
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| 地址： | 211112 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 灌流 培养 cho 细胞 制备 cldn18_2 抗体 方法 | ||
1.灌流培养CHO细胞制备抗CLDN18.2抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)细胞复苏：
将CHO细胞解冻后转移到基础培养基1中，离心弃上清，再用基础培养基1将细胞重悬后，置于二氧化碳摇床中培养至活细胞密度达到(3～6)×106cells/ml时转移至下一级培养；
(2)种子细胞扩增：
将步骤(1)得到的细胞接种到基础培养基1中进行培养，当活细胞密度达到(3～6)×106cells/ml时转移至下一级培养；
(3)WAVE种子灌流扩增：
将步骤(2)得到的细胞接种到基础培养基2中，再置于WAVE反应器中培养，培养2～5天后换液，至最终活细胞密度为(80～120)×106cells/ml；
(4)反应器生产：
将步骤(3)得到的细胞接入生物反应器中培养并收获；
所述CHO细胞能够表达抗CLDN18.2抗体。
2.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的离心条件为200～300g下离心3～8min。
3.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的基础培养基1为ActiPro。
4.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的二氧化碳摇床的培养条件为36.5±1℃，105～125rpm，5±0.2％CO2，78～82％湿度。
5.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的接种密度为(0.4～0.6)×106cells/ml。
6.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的基础培养基2的组分为：85～95％的ActiPro、1～8％的feed1、2～7％的cell boost 7a、0.2～0.7％的cellboost 7b，其中各组分质量百分比之和为100％。
7.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的换液速度为0.02～0.03nL/cell/day。
8.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的使用WAVE反应器进行培养的培养条件为36.5±1℃，pH 6.7～7.3，溶氧30±1％，14～18rpm。
9.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的接种密度为(4.5～5.5)×106cells/ml。
10.如权利要求1所述的制备抗体的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的当细胞活率为70～95％时收获。
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