[发明专利]木霉菌Azaphilones类次级代谢产物的应用

说明书

本发明公开了木霉菌Azaphilones类次级代谢产物的应用。木霉菌Azaphilones类次级代谢产物在制备抗氧化剂中的应用。一种工程菌株，其特征在于将以hph为筛选标记，Pcdna1为强启动子过量表达tgaza5的重组质粒转化SQR‑T037野生型菌株所得。所述的工程菌株在制备所述的木霉菌Azaphilones类次级代谢产物中的应用。本发明鉴定了一种azaphilones类新型抗氧化剂及其衍生物，并解析其合成基因簇，在医用和农用新药物或者药物中间体的开发、生产中有重要的价值。

技术领域

本发明涉及木霉菌Azaphilones类次级代谢产物的应用，属于应用微生物技术领域。

技术背景

随着连作年限的增加，土传有害真菌在土壤中的积累，给农业生产造成了极大的损失，如尖孢镰刀菌侵染引起的黄瓜和番茄枯萎病就是一种非常严重的土传病害(陈雪丽等， 2008)。相对抗病品质的选育和化学防控，生物防治具有环境友好、安全无毒等优点收到农业生产和研究的重视。其中，木霉属真菌已广泛用于多种植物真菌病害的防治，是一种较理想的生防真菌和植物促生菌(Plant Growth Promoting Fungus，PGPF)，占据重要的市场份额。但是，在实际应用中，木霉菌生物防治效果不稳定、持久性差、生防菌难定殖等不利因素也限制其更大规模的推广应用。理论研究上，目前国内外对木霉菌的促生机制和生防机制已经进行了大量的研究，但整体理论研究还处于不断完善的阶段，尤其对其次级代谢产物的功能、合成机制和应用研究鲜有深入的研究报道。

真菌次级代谢产物根据生物合成来源主要分为聚酮类(由聚酮合酶PolyketidesSynthases，PKS合成)、非核糖体多肽类(非核糖体多肽合成酶Non-ribosomal peptidesSynthases，NRPS合成)、萜类(萜类合成酶Terpenoids Synthases，TS合成)和生物碱类；此外还有一类聚酮合酶-非核糖体多肽合成酶(PKS-NRPS)合成，能够催化结合来源广泛的聚酮骨架和氨基酸生成结构丰富多样和生物活性物质广泛的天然产物。从已公布12株木霉菌基因组序列中，通过anti-SMASH鉴定出含有丰富的次级代谢产物合成基因簇，已经鉴定出10-25个PKS，12-34个NRPS，6-14个TS和1-4个PKS-NRPS。目前，木霉次生代谢产物相关研究集中在物质结构鉴定及其体外功能验证，而大多数产物的生物合成途径以及生物学功能仍未可知。研究木霉次生代谢产物的生物合成途径及其具体的生态功能有助于更好地改造和应用这些活性天然产物，对木霉及其次生代谢产物在农业生产应用中具有重要的理论价值和实践意义。

哈茨木霉SQR-T037(菌种保藏号CGMCC No.3308)是本课题组分离、筛选获得的一株生防木霉，能够拮抗多种植物病原真菌，并作为生物有机肥中的功能菌广泛应用于农业生产中。经过分析SQR-T037基因组中除了含有20个PKS，含有4个杂合PKS-NRPS，木霉菌种次级代谢产物与其他丝状真菌一样，大多数次级代谢合成基因簇在实验室环境中是沉默的，限制了对其合成产物及功能的研究。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供木霉菌Azaphilones类次级代谢产物的应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种重组表达质粒，其特征在于将以hph为筛选标记，Pcdna1为强启动子过量表达tgaza5的重组表达质粒。

所述的重组表达质粒，优选通过以下方法构建得到：