[发明专利]武装靶向TGF-β的特异性嵌合抗原受体细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种武装靶向TGF‑β的特异性靶向人NKG2DL的嵌合抗原受体的编码氨基酸序列，及其修饰的免疫应答细胞，其的制备方法和应用。本发明通过武装靶向TGF‑β的特异性靶向人NKG2DL的嵌合抗原受体的重组载体，并用其修饰免疫应答细胞的方法；获得的新型功能化免疫应答细胞能有效地靶向攻击多种肿瘤，及制备的用于治疗恶性肿瘤的制剂。本发明的武装靶向TGF‑β的特异性靶向人NKG2DL的嵌合抗原受体修饰的工程免疫细胞遏制肿瘤微环境中免疫抑制并阻止肿瘤细胞的免疫逃逸，能够明显提高肿瘤细胞的杀伤效率。

技术领域

本发明属于免疫治疗生物医药技术领域，涉及一种武装靶向TGF-β的特异性靶向人NKG2DL的嵌合抗原受体的氨基酸编码序列、及其修饰的免疫应答细胞，以及它们的制备方法和在药物制备中的应用。

背景技术

随着生物技术的飞速发展，免疫细胞治疗已成为癌症治疗领域的第四大疗法。

癌症免疫疗法主要包括过继性细胞治疗、免疫调节剂、肿瘤疫苗以及免疫结合点阻断治疗等。其中，在细胞治疗领域，CAR-T疗法无疑已成为研究机构和制药公司争相“追捧”的明星。

CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T-Cell，嵌合抗原受体T细胞)免疫疗法，其原理主要是通过取病人自身T细胞进行嵌合抗原受体的基因修饰，CAR-T细胞能够特异性地识别肿瘤相关抗原(肿瘤细胞标志物)，从而引导T细胞靶向肿瘤。相较于常规免疫细胞，CAR-T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性都更高，并且可以克服肿瘤局部免疫抑制微环境并打破宿主免疫耐受状态。该疗法在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。

然而，90％的癌症是实体瘤，更多种类的实体瘤以及更多的肿瘤表面特异性靶点抗原有待进一步确认。CAR-T免疫疗法应用于实体瘤治疗面临诸多挑战，包括CAR-T细胞对于肿瘤细胞上表达的特异性要求非常高、否则容易造成T细胞持续激活而杀伤正常细胞，或释放大量细胞因子引起严重副作用。其中，由于肿瘤微环境中肿瘤细胞可分泌大量的免疫抑制因子TGF-β，驯化浸润免疫细胞以抑制其抗肿瘤作用，导致针对实体瘤的嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法无法达到最佳疗效。

因此，发挥CAR-T技术应用的关键在于确定至少一种靶向肿瘤的合适抗原，这些抗原在肿瘤细胞表面高表达，而在正常细胞表面无表达或低表达。目前，大多数CAR的研发仅涉及单个靶标，由于肿瘤的异质性，它可能导致抗原阴性肿瘤的选择性存活和增殖。因此，设计可以识别和瞄准实体瘤上的多个位点而不是单个位点的新型CAR-T细胞是至关重要的。

近年来，研究表明，NKG2DL蛋白的表达是细胞处于“应激状态”的一个指标，其在健康组织中很少有表达或仅短暂地表达，而通常在不同来源的各种肿瘤细胞表面有较高水平的表达。NKG2DL蛋白的受体为NKG2D，研究显示，NKG2D-NKG2DL系统在机体的抗肿瘤免疫中发挥着重要作用，NKG2D通过识别肿瘤细胞表面产生的NKG2DL来传递活化信号并激活免疫系统，从而对肿瘤细胞发挥杀伤作用。除此之外，研究发现自身免疫性疾病患者的血清中含有可溶性NKG2DL，NKG2D-NKG2DL系统在治疗自身免疫性疾病、抗炎、抗衰老等方面起到一定作用(参见Legroux L等人，Frontiers in Immunology，(2019))。因此，NKG2DL的表达作为机体发生肿瘤时肿瘤细胞上的一个特异性的改变，为肿瘤的免疫治疗提供了一个更为精确的靶点，为相关新疗法和药物的开发提供了启示。