[发明专利]一种肝素钠的精制方法

权利要求书

1.一种肝素钠的精制方法，其特征在于：

（1）按酶解工序、离子交换吸附工序、洗涤工序、洗脱工序、沉淀工序得到肝素钠粗品沉淀物；

（2）一次脱色氧化：向步骤（1）中收集的沉淀物按粗品肝素钠活性与水体积比值为1：6亿IU/L的配比加水溶解，控制料液温度20~30℃，按粗品肝素钠重量的0.5%还加入EDTA，再加入NaOH溶液调节pH至9.0~11.0；按照加入水的体积2%的量，量取双氧水体积，并向双氧水中加入双氧水体积3倍的水混匀，均分成三份，每隔一小时，向料液中加入一份双氧水溶液，每次加入均搅拌料液3~5min，其余时间静置氧化；氧化过程中控制料液温度20~30℃，pH值9.0~11.0，以第一次加入双氧水溶液的时间开始计时，共氧化12h；

（3）过滤：一次脱色氧化结束，使用0.8μm滤膜进行过滤，收集滤液；

（4）一级分级沉淀：收集滤液，控制滤液温度35~40℃，加入滤液体积0.88倍的药用乙醇，搅拌均匀，保温35~40℃沉淀4 h；沉淀结束，去除上清收集沉淀物；

（5）二次脱色氧化：向步骤（4）中收集的沉淀物按粗品肝素钠活性与水体积比值为1:5亿IU/L的配比加水溶解，控制料液温度20~30℃，按粗品肝素钠重量的0.5%还加入EDTA，再加入NaOH溶液调节pH至9.0~11.0，按照加入水的体积2%的量，量取双氧水体积，并向双氧水中加入双氧水体积3倍的水混匀，均分成三份，每隔一小时，向料液中加入一份双氧水溶液，每次加入均搅拌料液3~5min，其余时间静置氧化，氧化过程中控制料液温度20~30℃，pH值9.0~11.0，以第一次加入双氧水溶液的时间开始计时，共氧化12h；

（6）过滤：二次脱色氧化结束，使用0.45μm滤膜进行过滤，收集滤液；

（7）二级分级沉淀：收集滤液，控制滤液温度35~40℃，加入滤液体积0.85倍的药用乙醇，搅拌均匀，保温35~40℃沉淀4 h；沉淀结束，去除上清收集沉淀物；

（8）把二级分级沉淀得到沉淀物加入4L/亿单位纯化水，经0.22 聚醚砜滤芯过滤；

（9）干燥：过滤后的滤液经真空冷冻干燥，得到精品肝素钠。

2.根据权利要求1所述的肝素钠的精制方法，其特征在于所述的酶解工序为双酶解2次除蛋白包括：

Ⅰ：配制10%浓度的2709碱性蛋白酶溶液：按水与粗品肝素钠重量比为10:1的配比向粗品肝素钠中加入水混合均匀，按水与肠衣盐重量比为100:3的配比向上述料液中加入肠衣盐混合均匀，再加入NaOH溶液调节pH至8.5~10.5，控制料液温度55~65℃，

Ⅱ：按酶与粗品肝素钠重量比为1:100的配比加入步骤Ⅰ配置的酶溶液，开始酶解3h；酶解完成，调节料液pH8.0~9.0，按粗品肝素钠与无水氯化钙重量比为10:3的配比向料液中加入无水氯化钙混合均匀，快速升温至85~95℃，保温15min；保温完成，趁热过滤；滤液控制料液温度55~65℃再加入NaOH溶液调节pH至8.5~10.5，控制料液温度55~65℃；

Ⅲ：按酶与粗品肝素钠重量比为1:100的配比加入10%浓度的水解蛋白酶溶液，开始酶解3h；酶解完成，调节料液pH8.0~9.0，按粗品肝素钠与无水氯化钙重量比为10:3的配比向料液中加入无水氯化钙混合均匀，快速升温至85~95℃，保温15min；保温完成，趁热过滤，滤液控制料液温度40~50℃，加入与无水氯化钙重量相同的无水碳酸钠，搅拌反应15min，过滤。

3.根据权利要求1所述的肝素钠的精制方法，其特征在于所述离子交换吸附工序：按粗品肝素钠活性与水体积比值为1:8 亿IU/L的配比向沉淀物中加水，将沉淀物完全溶解，按粗品肝素钠活性与树脂体积比值为1:8 亿IU/L配比向沉淀物中加入树脂，其中所用树脂为碱性阴离子树脂A98，控制体系温度30~40℃，搅拌吸附4h，吸附完毕，去除不吸附的残留液体。

4.根据权利要求1所述的肝素钠的精制方法，其特征在于所述洗涤工序：按粗品肝素钠活性与5%肠衣盐溶液体积比值为1:8 亿IU/L的配比向树脂中加入5%肠衣盐溶液，控制温度30~40℃，pH7.0~8.0，搅拌洗涤2h，洗涤完成去除洗涤液，再重复此步骤2次。