[发明专利]一种SARS-CoV-2病毒核酸检测的引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括靶向目的基因SARS-CoV-2的N基因和/或ORF1ab基因的向导DNA，其中：

所述N基因的向导DNA为如SEQ ID NO.5所示的单链DNA分子；

所述ORF1ab基因的向导DNA为SEQ ID NO.6所示的单链DNA分子。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括用于扩增SARS-CoV-2的N基因和/或ORF1ab基因的引物组、针对SARS-CoV-2的N基因和/或ORF1ab基因的带有荧光标记的分子信标和PfAgo酶。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组中用于扩增N基因的引物对包括引物NF和引物NR；

所述引物NF为如SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子；

所述引物NR为如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子；

所述引物组中用于扩增ORF1ab基因的引物对包括引物OF和引物OR；

所述引物OF为如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子；

所述引物OR为如SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述针对SARS-CoV-2的N基因的分子信标中的核酸序列为如SEQ ID NO.7所示的单链DNA分子；

所述针对SARS-CoV-2的ORF1ab基因的分子信标中的核酸序列为如SEQ ID NO.8所示的单链DNA分子。

5.如权利要求2-4任一项所述试剂盒的制备方法，其特征在于，为如下(1)或(2)：

(1)所述引物组、所述向导DNA、所述分子信标和所述PfAgo酶单独包装；

(2)所述引物组、所述向导DNA、所述分子信标和所述PfAgo酶按比例混合在一起。

6.如权利要求1-4任一项所述的试剂盒在鉴定或辅助鉴定新型冠状病毒SARS-CoV-2的非疾病诊断和治疗目的上的用途。

7.一种鉴定或辅助鉴定新型冠状病毒SARS-CoV-2的非疾病诊断和治疗目的的方法，其特征在于，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，采用如权利要求2-4任一项所述的试剂盒进行检测；如检测到的荧光值高于阴性对照、待测病毒为候选的新型冠状病毒SARS-CoV-2，如果不满足上述条件、待测病毒为候选的非新型冠状病毒SARS-CoV-2。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1、以待测样本中的核酸提取液为模板，采用如权利要求2中所述的引物组进行逆转录PCR对新型冠状病毒SARS-CoV-2的待检测区域进行扩增；

S2、将权利要求1中所述的向导DNA、权利要求2中所述的分子信标和PfAgo酶与所述S1步骤得到的PCR扩增产物混合，进行酶切反应；

S3、检测上述反应体系中所述分子信标切割后产生的荧光情况，若荧光值与阴性对照相比有显著差异，则判断PCR产物中含有新型冠状病毒SARS-CoV-2的特异性扩增产物，从而推断样品中含有SARS-CoV-2病毒；若荧光值与阴性对照相比没有显著差异，则判断PCR产物中不含有新型冠状病毒SARS-CoV-2的特异性扩增产物，从而推断样品中不含有SARS-CoV-2病毒。