[发明专利]一种SARS-CoV-2病毒核酸检测的引物组、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种SARS‑CoV‑2病毒核酸检测的引物组、试剂盒及其应用。本发明通过设计针对SARS‑CoV‑2病毒的N基因和ORF1ab基因的引物组，该试剂盒包括该引物组、靶向目的基因的向导DNA、带有荧光标记的分子信标和PfAgo酶。采用本发明提供的引物组能够简单快速地对新冠病毒核酸进行扩增，具有重复性好，敏感度高，特异性强的特点。

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体涉及一种SARS-CoV-2病毒核酸检测的引物组、试剂盒及其应用。

背景技术

目前，荧光定量PCR技术是新型冠状病毒核酸检测的主流方法。该方法基于PCR技术，通过针对于新型冠状病毒基因组的特异性序列设计引物对，对目的核酸片段进行特异性扩增，与此同时在扩增系统中加入相应Taqman探针，探针的两端分别标记有荧光基团和淬灭基团。扩增反应在荧光定量PCR仪中进行，随着热循环的进行，结合在单链模板上的探针会被DNA聚合酶的外切酶活性切割，荧光基团与淬灭基团分离，解除淬灭作用，产生荧光信号，对该信号进行实时检测，就可以判断样本中是否含有新型冠状病毒。目前临床检测主要采用是针对多个目的序列的多重荧光检测法，靶基因包含SARS-CoV-2基因组中3段保守基因序列：开放读码框1ab(open reading frame 1ab，ORF1ab)、核壳蛋白(nucleocapsidprotein，N)基因以及包膜蛋白(envelope，E)基因等。

虽然Taqman法已经得到普及，并为本次疫情的防控提供了有力保障，但是基于荧光PCR的核酸检测方法对于仪器和操作人员的要求都很高，特别是多通道荧光定量PCR仪价格昂贵，约为25-30万元/台，以目前的检测通量，每天每台只能检测3批次，严重限制了检测通量。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种SARS-CoV-2病毒核酸检测的引物组、试剂盒及其应用。本发明以新型冠状病毒核壳蛋白N基因及ORF1ab基因为检测靶基因，反应体系包括针对N基因的引物组、针对ORF1ab基因的引物组、PfAgo酶、向导DNA和分子信标；向导DNA分子可指导PfAgo酶对靶基因(N基因和/或ORF1ab基因)进行切割，产生16nt的ssDNA，ssDNA分子与游离的PfAgo酶装配成复合物，对与新生成的向导DNA互补的分子信标进行特异性切割，产生荧光，从而实现检测。

为实现上述技术目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种引物组，包括SARS-CoV-2的N基因引物对和SARS-CoV-2的ORF1ab基因引物对，其中：

所述SARS-CoV-2的N基因引物对包括引物NF和引物NR；

所述引物NF为如SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子，或由如SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代、和/或缺失、和/或添加且与如SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子具有相同功能的DNA分子；

所述引物NR为如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子、或由如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代、和/或缺失、和/或添加且与如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子具有相同功能的DNA分子；

所述SARS-CoV-2的ORF1ab基因引物对包括引物OF和引物OR；

所述引物OF为如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子、或由如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代、和/或缺失、和/或添加且与如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子具有相同功能的DNA分子；

所述引物OR为如SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子、或由如SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代、和/或缺失、和/或添加且与如SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子具有相同功能的DNA分子。