[发明专利]醇脱氢酶及其编码基因和在催化合成(R)-苯基乙二醇中的应用有效

专利信息
申请号: 202010813435.3 申请日: 2020-08-13
公开(公告)号: CN111944774B 公开(公告)日: 2022-05-20
发明(设计)人: 李玮;张红蕾;杜洁;张超;韩孟楠;王旭明;傅双庆 申请(专利权)人: 河北大学
主分类号: C12N9/04 分类号: C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/22;C12R1/19
代理公司: 石家庄国域专利商标事务所有限公司 13112 代理人: 张莉静
地址: 071002 *** 国省代码: 河北;13
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摘要:
搜索关键词: 脱氢酶 及其 编码 基因 催化 合成 苯基 乙二醇 中的 应用
【权利要求书】:

1.编码醇脱氢酶MLADH的基因mladh在催化底物2-羟基苯乙酮(2-HAP)合成(R)-苯基乙二醇中的应用,所述醇脱氢酶MLADH的氨基酸序列如序列表中的序列1所示,所述基因mladh的序列如序列表中的序列2所示。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征是,将醇脱氢酶基因mladh插入到载体pGEX4T-1中,并转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞,得到重组大肠杆菌BL21(DE3)/ pGEX4T-1-mladh,利用重组大肠杆菌发酵表达重组蛋白MLADH,经纯化后得到目标醇脱氢酶MLADH,将醇脱氢酶MLADH应用于(R)-苯基乙二醇的催化合成。

3.根据权利要求1所述的应用,其特征是,将醇脱氢酶基因mladh编码得到的醇脱氢酶MLADH与甲酸脱氢酶FDH构建双酶偶联催化体系,在所述体系中,醇脱氢酶MLADH与甲酸脱氢酶FDH的酶活性比例为1∶5~10。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征是,所述体系采用有机相/水相两相溶剂体系,其中,以大豆油或邻苯二甲酸二丁酯为有机相,以磷酸钾缓冲液为水相,有机相与水相的体积比为1∶1~4,在两相溶剂体系中,底物2-HAP的浓度为40~60g/L。

5.根据权利要求4所述的应用,其特征是,所述磷酸钾缓冲液的pH为7.0,磷酸钾缓冲液中含有0.5g / L甲酸钠和2mM NAD+

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