[发明专利]一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法

说明书

本发明的目的是提供一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法，其平均分子量为3500～6500D。方法参考依诺肝素钠的制备工艺，以猪来源的硫酸软骨素钠为原料，经过季铵盐盐化、苄基酯化、降解、氧化脱色、分级控制、冻干等工艺，制备出平均分子量在3500～6500D的一种低分子硫酸软骨素钠。该方法操作简单，工艺稳定，因与依诺肝素钠生产工艺相似，可以轻松实现工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法，属于医药领域。

背景技术

糖胺聚糖(glycosaminoglycan，GAG)是重复二糖单位组成的线性多糖，此二糖单位由一个己糖胺(D-葡糖胺或D-半乳糖胺)通过糖苷键连接一个糖醛酸(D-葡糖醛酸或L-艾杜糖醛酸)或D-半乳糖组成，二糖单位中至少有一个单糖残基带有负电荷的羧基或硫酸基，因此糖胺聚糖又被称为酸性粘多糖。糖胺聚糖广泛存在于动物细胞表面及细胞基质中，除HA 外，在动物体内常常以蛋白聚糖的形式存在，并通过与一系列特殊蛋白结合参与神经系统发育、组织形态发生、细胞分裂、炎症、肿瘤发生发展和病毒侵染等多种生理和病理过程。根据单糖残基间的连接类型及硫酸基数目和位点的不同，糖胺聚糖可分为以下几个主要成分：透明质酸(hyaluronic acid，HA)、肝素/硫酸乙酰肝素(heparin/heparan sulfate，Hep/HS)、硫酸软骨素/硫酸皮肤素(chondroitin sulfate/dermatan sulfate，CS/DS)和硫酸角质素(keratan sulfate， KS)。

作为糖胺聚糖的主要种类，硫酸软骨素早在1884年就被Krukenberg等分离出来，但不同类别硫酸软骨素的结构直至20世纪60年代才初步明确。硫酸软骨素是由D-葡萄糖醛酸 (GlcA)和N-乙酰氨基半乳糖(GalNAc)经β-1，3-糖苷键组成的二糖单位经β-1，4-糖苷键重复组成的直链多糖。因硫酸基数目和连接位点的不同可分为多种类型的硫酸软骨素，见表1。自然界中大多数的硫酸软骨素主要是由A单元和C单元两种二糖单位组成的，通常将以A单元为主组分的硫酸软骨素称为CS-A，如来自猪、牛、羊等软骨的硫酸软骨素；以C单元为主组分的硫酸软骨素称为CS-C，如来自于鲨鱼软骨的硫酸软骨素。

表1：硫酸软骨素的分类及二糖结构

硫酸软骨素具有多种重要生物功能如抗氧化、抗炎、降血脂、抗凝血等，此外还具有改善食物风味、口感、光泽及保湿性等作用。2010年硫酸软骨素被《中华人民共和国药典》收录，并将其列为防治心血管疾病和关节病的最佳药物。现在多数市售硫酸软骨素产品为天然提取的大分子硫酸软骨素，分子量约为15000～55000，而低分子硫酸软骨素生物利用度更高，药理作用和治疗效果更优。目前低分子硫酸软骨素的降解方法主要有4类：硫酸软骨素裂解酶降解、氧化剂降解、酸降解和碱降解。开发不同种类的低分子硫酸软骨素是其未来的发展趋势。

发明内容

本发明的目的是提供一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法，其平均分子量为3500～ 6500D。方法参考依诺肝素钠的制备工艺，以猪来源的硫酸软骨素钠为原料，经过季铵盐盐化、苄基酯化、降解、氧化脱色、分级控制、冻干等工艺，制备出平均分子量在3500～6500D的一种低分子硫酸软骨素钠。该方法操作简单，工艺稳定，因与依诺肝素钠生产工艺相似，可以轻松实现工业化生产。

下面对本发明方法进行以下具体描述：

(1)季铵盐盐化

将硫酸软骨素钠溶于纯化水制成硫酸软骨素钠水溶液，将苄索氯铵溶于纯化水制成苄索氯铵水溶液，将苄索氯铵溶液缓慢加入到硫酸软骨素钠溶液中，边加边搅拌，在45～50℃下进行反应，反应结束后离心，用纯化水洗涤沉淀物，干燥得硫酸软骨素季铵盐。

(2)苄基酯化