[发明专利]一种蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备与检测方法在审
| 申请号： | 202010816273.9 | 申请日： | 2020-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN112014558A | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 张坤;徐红梅;陈佳欢;贺振;庄新建;甘海峰 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535;C07K16/10 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 刘艳艳 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蚕豆 潜隐 病毒 抗体 夹心 免疫 检测 试剂盒 制备 方法 | ||
1.一种蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括VCV-M特异性多克隆抗体，VCV-M特异性多克隆抗体包被于多克隆抗体包被板上；所述VCV-M特异性多克隆抗体的免疫原氨基酸序列为SEQ ID No.3。
2.根据权利要求1所述的蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括碱性磷酸酶标记多克隆抗体、基因工程重组VCV-M外壳蛋白标准品、质控品。
3.根据权利要求1或2所述的蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括辅助试剂：提取反应液、洗涤缓冲液、酶缓冲液、显色剂及反应终止液。
4.一种如权利要求1至3任意一项所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：基因工程重组VCV-M外壳蛋白标准品的制备步骤、VCV-M特异多克隆抗体的制备步骤、多克隆抗体包被板的制备步骤。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述VCV-M外壳蛋白标准品的制备步骤中，以感染VCV-M的蚕豆叶片的总RNA为模版，使用引物：SEQ ID No.1的VCV-M/CP/F和SEQ ID No.2的VCV-M/CP/R扩增获得VCV-M的CP基因，克隆入pET-28a载体得到重组质粒pET28a-CPVCV-M，经原核表达纯化获得44.5kDa的VCV-M外壳蛋白。
6.根据权利要求4所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述VCV-M特异多克隆抗体的制备步骤中，采用VCV-M外壳蛋白免疫动物获得VCV-M特异性多克隆抗体。
7.根据权利要求4所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述多克隆抗体包被板，用纯化的VCV-M外壳蛋白免疫动物获得的VCV-M特异性多克隆抗体包被酶标板制作而成。
8.根据权利要求4所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，还包括碱性磷酸酶标多克隆抗体的制备步骤，所述碱性磷酸酶标多克隆抗体，用纯化的VCV-M外壳蛋白免疫动物获得的VCV-M特异性多克隆抗体标记碱性磷酸酶制作而成。
9.根据权利要求4-8任一项所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，还包括质控品的制备以及辅助试剂的制备步骤。
10.一种蚕豆潜隐病毒M的检测方法，其特征在于，使用权利要求1-3任意一项所述的试剂盒实现蚕豆潜隐病毒M的检测。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于扬州大学，未经扬州大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010816273.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
