[发明专利]一种蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备与检测方法

说明书

本发明公开了一种蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备与检测方法，测试剂盒包括ELISA用微孔板，酶标抗体，缓冲液，显色液，终止液，其中微孔板上包被有氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的VCV‑M特异的多克隆抗体，酶标抗体为碱性磷酸酶标记得VCV‑M特异性多克隆抗体。本发明采用的免疫原为基因工程表达的VCV‑M外壳蛋白抗原，在血清学水平上为VCV‑M的检测提供了一种快速、灵敏、简便的方法，不仅经济实用，也为后续蚕豆的田间种植及其病毒病的防控提供一定的有效方法。

技术领域

本发明属于植物病毒检测的生物技术产品技术领域，具体涉及一种蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备与检测方法。

背景技术

蚕豆潜隐病毒(Vicia cryptic virus M，VCV-M)，2009年在中国浙江省杭州市第一次被报道。VCV-M主要通过种子或经细胞有丝分裂的方式进行传播，植株被侵染后无明显症，但它经常与其他病毒协同侵染植物，表现出较为严重的症状。

VCV-M属于是混合病毒科(Amalgaviridae)，混合病毒属(Amalgavirus)的成员。该病毒基因组约为3.4kb，VCV-M基因组有两条双链RNA片段组成。RNA的正链包含两个部分重叠的ORF，ORF2通过+1的核糖体移位。ORF2编码的蛋白包含RNA依赖的RNA聚合酶保守基序，而ORF1是推定的病毒外壳蛋白(CP)，但其具体功能尚未知。后续调查发现，VCV-M在江苏省扬州市发生越来越普遍，部分地区呈现流行爆发趋势。因此，发展VCV-M的快速检测鉴定技术迫在眉睫，目前，VCV-M目前还没有关于VCV-M基本生物学特性的进一步实验研究，此外目前尚无VCV-M特异性抗血清，无法利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测。

发明内容

目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备与检测方法。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种蚕豆潜隐病毒M双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括VCV-M特异性多克隆抗体，VCV-M特异性多克隆抗体包被于多克隆抗体包被板上。

所述VCV-M特异性多克隆抗体的免疫原氨基酸序列为：MAQFETSDPANVGEGAGIGGIRSKAEEQATVNQAMNAIVRLGFPEDIFDIDALLERGFTAKSWCDYCRAITSITERRDMSALLALGGTRFWELPIDATLENFIDFVKWIKSPEGRDAQTAAAKKRSLQKRAVGGLSTADVAIIQMGNSMIADYQKERKKARAPIEEQQRHLRRELRLLDDELAATELSVKERFGCIATYEGPDNHTVSREAYKLYLEYCRENRVRAIASHQGGFDKAVEMFGAKVRETHFRDYLLDATRAEFIRDYYNQKVLHLDRSGEKKQAGTFRNLVVAGCGEMALDAPPITTFIFDGEDSCGESAQSGSAAGEPAAKKKRGRPAGTGKAAARDKADKRPPKKRGDERNPAQPIPQGQEDQDTAALGDGSQPNDPNVNVPV(SEQ IDNo.3)。

所述试剂盒还包括碱性磷酸酶标记多克隆抗体、基因工程重组VCV-M外壳蛋白标准品、质控品。进一步的，还包括辅助试剂：提取反应液、洗涤缓冲液、酶缓冲液、显色剂及反应终止液。

前述检测试剂盒的制备方法，包括基因工程重组VCV-M外壳蛋白标准品的制备步骤、特异多克隆抗体的制备步骤、VCV-M多克隆抗体包被板的制备步骤、碱性磷酸酶标多克隆抗体的制备步骤、质控品的制备以及辅助试剂的制备步骤。