[发明专利]一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法

权利要求书

1.一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，其特征在于：按照如下步骤进行：

步骤1：将虾粉及DB7801分别用水浸泡，浸泡2小时后，105℃条件下沸腾30分钟，于6000rpm，8min离心，取上清液待用；

步骤2：配制MRSA培养基；

步骤3：在250mL平底瓶中装200mL MRSA培养基，接种保存的格氏乳杆菌 LG-G12甘油管，后置于37℃恒温培养箱中静置培养12小时，再转接2%至另一个新鲜的200mL MRSA培养基中，后置于37℃恒温培养箱中静置培养6至8小时，得到格氏乳杆菌 LG-G12种子液；

步骤4：利用步骤1完成的上清液及虾粉，配制发酵培养基；

步骤5：在250mL平底瓶中装200mL发酵培养基，接种2%步骤3所得的格氏乳杆菌LG-G12种子液，置于37℃恒温培养箱中静置培养12小时，检测OD₆₀₀、pH及发酵液活菌数；

步骤6：根据步骤5的检测数据优化培养基配方：配制另一发酵培养基放入发酵罐中进行发酵培养，在另一发酵培养基的基础上，添加5g/L的碳酸钙，培养基装量为4L，起始培养基pH为7.2，灭菌消毒条件为温度121℃、时间25分钟，降温至36~38℃，以2~3％的接种量接入格氏乳杆菌 LG-G12种子液，保持温度37℃，搅拌转速80rpm，并且通入氮气维持发酵罐压力在0.03MPa，期间检测发酵液在600nm波长处的吸光值及pH值，待pH值不下降或降到4.4左右时，停止发酵，取样离心，得到菌泥；

步骤7：配制一种或一种以上的保护剂，将保护剂进行灭菌处理，条件为温度115℃、15分钟，灭菌后迅速降温至10~20℃待用；

步骤8：按照菌泥：保护剂为1:2的比例进行乳化及真空冷冻干燥，得到格氏乳杆菌LG-G12冻干菌粉；

步骤9：格氏乳杆菌LG-G12冻干菌粉分别贮存在37℃、25℃、4℃与-18℃环境中，于0天、1周、2周、3周、1月、2月与3月分别取样检测MRSA培养基中的活菌数，检测冻干菌粉活菌数变化。

2.根据权利要求1所述的一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，其特征在于：所述的MRSA培养基包括：葡萄糖20 g/L，牛肉浸粉10 g/L，蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，无水乙酸钠5 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸氢二铵2 g/L，吐温-80 1 g/L，硫酸镁0.25 g/L，硫酸锰0.05 g/L。

3.根据权利要求1所述的一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，其特征在于：所述的发酵培养基包括：葡萄糖20 g/L，牛肉浸粉10 g/L，蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，无水乙酸钠5 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸氢二铵2 g/L，吐温-80 1 g/L，硫酸镁0.25 g/L，硫酸锰0.05 g/L，半胱胺酸盐2 g/L，虾粉0~5g/L，虾粉上清液0~10g/L，发酵用大豆蛋白粉DB7801上清液0~10g/L。

4.根据权利要求1所述的一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，其特征在于：步骤6中所述的离心条件为温度4℃，转速8000rpm，离心时间8min。

5.根据权利要求1所述的一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，其特征在于: 步骤7中所述的保护剂配方包括：海藻糖8~14%，蔗糖4~8%，糊精2~8%，葡萄糖1~4%，果胶1~4%，水73%。

6.根据权利要求1所述的一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，其特征在于：步骤8中所述的真空冷冻干燥的条件为：首先在温度-80℃条件下预冻6h，后在冷阱温度低于-57℃、真空度0.1Pa条件下，冷冻干燥25~32小时。

7.根据权利要求1所述的一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，其特征在于：所述的格氏乳杆菌LG-G12（Lactobacillus gasseri LG-G12），保藏地点为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M2019829，保藏时间为2019年10月17日。