[发明专利]一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法

说明书

本发明涉及微生物技术领域，具体的讲是一种格氏乳杆菌LG‑G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，按照如下步骤进行：在MRSA培养基接种格氏乳杆菌LG‑G12，再转接2%至另一个MRSA培养基中得到格氏乳杆菌LG‑G12种子液；在发酵培养基中接种2%种子液，配制另一发酵培养基，以2~3％的接种量接入格氏乳杆菌LG‑G12种子液，pH值降到4.4左右时，停止发酵，取样离心，得到菌泥；按照菌泥：保护剂为1：2的比例进行乳化及真空冷冻干燥，得到格氏乳杆菌LG‑G12冻干菌粉。与现有技术相比，格氏乳杆菌LG‑G12发酵液活菌数高且无杂质沉淀，冻干粉得率比现有水平高一倍，冻干粉的活菌数有明显提高，菌粉存活率及稳定性好，比现有生产水平有显著提高。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体的讲是一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法。

背景技术

格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）是益生菌中常见的一种 ,其广泛存在于人和动物的胃肠道中。格氏乳杆菌属于革兰氏染色阳性杆菌，乳杆菌属，不具触酶、氧化酶及运动性，在好氧及厌氧环境均能生长，属于兼性异质发酸性菌株，葡糖代谢时不产生气体，形态呈球形或卵圆形，无芽孢，无荚膜。能在pH值为4 .0~5 .0甚至更低的酸性环境中生长，最适生长温度为35℃~38℃，发酵产物L-（+）-乳酸为主。

格氏乳杆菌是健康新生儿消化道中分离纯化得到，属人体原生菌种，其能够在胃液中存在并分泌乳酸、乙酸等促进胃部的消化能力；另外，格氏乳杆菌能够调整肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物的增殖，对肠道致病菌产生拮抗作用。作为益生菌，格氏乳杆菌同样具有增强机体免疫力，促进营养吸收提高造血功能，排出肠内毒素并延缓老化，抗过敏等功能。由于益生菌无残留，不产生耐药性等优点，目前，己普遍应用于动物词料生产中，人们普遍认为是有前途的抗生素的替代品。而影响格氏乳杆菌菌粉质量的因素包括菌粉活菌数高低、菌粉稳定性及在胃肠液的存活率，而菌粉活菌数则是由格氏乳杆菌的发酵及冻干过程的存活率所决定的。

因此设计一种可以实现格氏乳杆菌高密度发酵和提高菌粉质量的方法是十分有必要的。

发明内容

本发明突破了现有技术的难题，设计了一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法。

为了达到上述目的，本发明设计了一种格氏乳杆菌LG-G12高密度发酵及提高菌粉质量的方法，按照如下步骤进行：

步骤1：将虾粉及DB7801分别用水浸泡，浸泡2小时后，105℃条件下沸腾30分钟，于6000rpm，8min离心，取上清液待用；

步骤2：配制MRSA培养基；

步骤3：在250mL平底瓶中装200mL MRSA培养基，接种保存的格氏乳杆菌 LG-G12甘油管，后置于37℃恒温培养箱中静置培养12小时，再转接2%至另一个新鲜的200mL MRSA培养基中，后置于37℃恒温培养箱中静置培养6至8小时，得到格氏乳杆菌 LG-G12种子液；

步骤4：利用步骤1完成的上清液及虾粉，配制发酵培养基；

步骤5：在250mL平底瓶中装200mL发酵培养基，接种2%步骤3所得的格氏乳杆菌LG-G12种子液，置于37℃恒温培养箱中静置培养12小时，检测OD₆₀₀、pH及发酵液活菌数；

步骤6：根据步骤5的检测数据优化培养基配方：配制另一发酵培养基放入发酵罐中进行发酵培养，在另一发酵培养基的基础上，添加5g/L的碳酸钙，培养基装量为4L，起始培养基pH为7.2，灭菌消毒条件为温度121℃、时间25分钟，降温至36~38℃，以2~3％的接种量接入格氏乳杆菌 LG-G12种子液，保持温度37℃，搅拌转速80rpm，并且通入氮气维持发酵罐压力在0.03MPa，期间检测发酵液在600nm波长处的吸光值及pH值，待pH值不下降或降到4.4左右时，停止发酵，取样离心，得到菌泥；